请教淋巴细胞画门问题

michellexiao

检测小鼠肿瘤组织中细胞表面抗原CD3 CD4 CD8的占比，最后画出来的CD3 CD4 CD8未分群，不知何缘故，是否样本原因？ 或是画门不当，跪求解答，附件为测试样本及单管荧光，感谢

tiger

要用CD45圈淋巴细胞，并加死活染料。

michellexiao

tiger 发表于 2019-4-10 17:18
要用CD45圈淋巴细胞，并加死活染料。

老师，我看文献上没用CD45圈淋巴细胞呢，他就是同时染了CD3,CD4,CD8抗体，然后以CD3为门控，画出CD4 CD8，这样不可以么，不是很明白，还请赐教

niwanmao

选了一个数据看，首先，仪器存在液路不稳定，可能流动室比较脏，对信号有影响；其次，样本状态不好，大多是死细胞，所以需要优先使用新鲜样本。
这两个问题解决了，可能你的结果就会改善。

tiger

michellexiao 发表于 2019-4-10 20:39
老师，我看文献上没用CD45圈淋巴细胞呢，他就是同时染了CD3,CD4,CD8抗体，然后以CD3为门控，画出CD4 CD8 ...

你是分析肿瘤组织中Til的占比，还是分析Til中CD4+T和CD8+T的占比？不论分析哪个指标，CD45都是必须的，因为TIL在肿瘤细胞中很难用FCS/SSC圈出来。

michellexiao

niwanmao 发表于 2019-4-11 08:42
选了一个数据看，首先，仪器存在液路不稳定，可能流动室比较脏，对信号有影响；其次，样本状态不好，大多是 ...

万分感谢倪老师～  涨经验了，再进步

michellexiao

tiger 发表于 2019-4-11 15:57
你是分析肿瘤组织中Til的占比，还是分析Til中CD4+T和CD8+T的占比？不论分析哪个指标，CD45都是必须的，因 ...

非常谢谢老师的解答，赶紧加订CD45去～

qingshi

niwanmao 发表于 2019-4-11 08:42
选了一个数据看，首先，仪器存在液路不稳定，可能流动室比较脏，对信号有影响；其次，样本状态不好，大多是 ...

肿瘤细胞til分析，需要去死活，和组织新鲜不新鲜无关，CD45染色必须的，有的肿瘤做富集是必须的。

niwanmao

qingshi 发表于 2019-5-18 19:34
肿瘤细胞til分析，需要去死活，和组织新鲜不新鲜无关，CD45染色必须的，有的肿瘤做富集是必须的。 ...

我们临床上处理有深刻体会，新鲜、处理手法到位，很重要。

qingshi

niwanmao 发表于 2019-5-19 20:15
我们临床上处理有深刻体会，新鲜、处理手法到位，很重要。

嗯嗯是的