胞内活性氧疑问

h951595223

楼主做胞内活性氧检测，使用的是DCFH-DA探针，按照使用说明孵育染色，结果如图，分析的方式是根据平均荧光强度来判断胞内活性氧的多少，现有以下几个疑问：1、未经药物处理组荧光显微镜下观察也有较强的绿色荧光，是否正常；2药物处理组FSC SSC图中因为凋亡左移的细胞群发现是没有荧光，分析时是否需要将这群细胞圈入门内；3、细胞经药物处理发生凋亡时，胞内活性氧是否就一定会增加，麻烦各位前辈指点一下

niwanmao

1、未经药物处理有绿色荧光可以的，正常样本也存在活性氧，主要是与药物处理组相比如何。
2、凋亡细胞我认为不应该圈进去，因为活性氧是早期事件。
3、活性氧是否增加，与药物的机制有关。

lkpo456

我来补充一些，
（1）关于凋亡ROS的我特地的做过，我用的是顺铂刺激，我发现只有在前2-6小时内有明显的
增加，细胞死了以后现象就比较乱；
（2）还有一点就是因为我是化学背景的我发现测定ROS的探针是反应性型的，如果你样本细胞数量差别很大的时候那分配到每个细胞的探针数量就不同，在30分钟的染色时间内探针一般都会反应完，会造成假阳性。

这是我的浅见还请各位老师斧正

h951595223

niwanmao 发表于 2019-4-16 21:45
1、未经药物处理有绿色荧光可以的，正常样本也存在活性氧，主要是与药物处理组相比如何。
2、凋亡细胞我认 ...

谢谢倪老师的指点

zxt2009

lkpo456 发表于 2019-4-16 22:56
我来补充一些，
（1）关于凋亡ROS的我特地的做过，我用的是顺铂刺激，我发现只有在前2-6小时内有明显的
增 ...

老哥厉害，真是经验之谈了，学习了！