做细胞周期的流式前处理的有关问题

楚雪菡

老师，您好，关于细胞周期我有几个问题。我现在做的是造血分化方面，使一种白血病细胞向巨核系分化，出现几个问题。

1.收细胞的时候，觉得细胞很多，但是经过75%乙醇过夜处理之后，离心之后细胞沉淀就会很少并且很虚，所以想问的是：75%的乙醇过夜处理，破的膜是细胞膜还是核膜还是都破，是怎么破膜的？如果通俗来讲是在膜上留下洞，方便PI染料进入吗？还是其他的方式呢？

2.有老师说乙醇固定之后，细胞会特别脆，容易破碎，因为我们需要检测的是完整的细胞核，所以离心的速度最大可以达到多大呢？我们一般是1000rpm/min

3.在用RNAase消化的时候，我们采用的是37度孵育箱孵育，而并不是水浴，会对结果产生影响吗？

niwanmao

你要提取细胞核的话，给你推荐一个配方：

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楚雪菡

niwanmao 发表于 2019-4-28 16:31
你要提取细胞核的话，给你推荐一个配方：
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老师，我们不是提取细胞核的，我们也是做细胞周期的，看二倍体向四倍体，八倍体的分化过程，只是不明白75%固定过夜究竟是破的哪个膜?

niwanmao

楚雪菡 发表于 2019-4-28 20:19
老师，我们不是提取细胞核的，我们也是做细胞周期的，看二倍体向四倍体，八倍体的分化过程，只是不明白75 ...

乙醇对胞膜和核膜都会影响的。

楚雪菡

niwanmao 发表于 2019-5-2 23:27
乙醇对胞膜和核膜都会影响的。

好的，谢谢老师。