肿瘤浸润淋巴细胞 TIL 流式检测

124895811

各位大神好，我是一位流式小菜鸟，最近做了挺久的TIL，但总是不尽如人意，直接上图吧~

S2

S3

S4

我先做了脾组织里的T细胞（如上图），然后再去看肿瘤的TIL，（如下图）

T1

T2

T3

T4

请问:
1.我的去细胞碎片和 去黏连的 圈群 有要改进的地方嘛？~
2.为什么 我做出来的肿瘤组织里的 TIL，CD3+细胞那么多？
3.还有下面2张图，是我的对照组（没有加抗体，只有细胞），为什么细胞群右上角有个凸起~有做TIL的大神嘛~
做的是MC38，脾用磨的，肿瘤用ika分散器 分散，然后过400目滤网
4.还有最后一个问题是~我看别的大佬的文献里，流式测TIL，cd4+或者cd8+T 细胞百分比很高，有的达到了30%-40%，是怎么做粗来的？我肿么才3-4%呢~ 求大佬们指点~

C1

C2

niwanmao

124895811 发表于 2019-5-1 14:30
1.请问CD3不是T细胞的标志么，CD3抗体会结合除了T细胞以外的其他细胞么
2.是否加个 死活染料 会好些？， ...

CD3是T细胞的标记，但关键你这里计算的分母，是所有的细胞，所有的细胞信号中，包括了大量的碎片、实体组织细胞、死细胞等等。
另外，加死活当然好，但对于一些实体组织细胞和碎片，还是排除不干净的。

niwanmao

去碎片和去粘连的门问题不大。但是圈的这个门里面，不是纯粹的淋巴细胞，还包括了单核和巨噬，以及一些组织细胞和排除不干净的实体细胞，因此，CD3的比例波动很大。
建议你最好加一个CD45，可以使你的结果更漂亮，更接近其它研究的结果。

124895811

niwanmao 发表于 2019-4-30 22:52
去碎片和去粘连的门问题不大。但是圈的这个门里面，不是纯粹的淋巴细胞，还包括了单核和巨噬，以及一些组织 ...

1.请问CD3不是T细胞的标志么，CD3抗体会结合除了T细胞以外的其他细胞么
2.是否加个 死活染料 会好些？，。、

qingshi

你得让倪老师好好教育教育哈哈

124895811

niwanmao 发表于 2019-5-2 23:22
CD3是T细胞的标记，但关键你这里计算的分母，是所有的细胞，所有的细胞信号中，包括了大量的碎片、实体组 ...

我还有最后一个比较重要的疑问哦~
就是 检测TIL的时候，理论上是不是应该检测 肿瘤微环境 里面T淋巴细胞 占 所有细胞 的 含量与比例，不然如果我只从淋巴细胞群里面找，最多不是也只能知道 淋巴细胞亚群 百分比的变化，却不能知道 T淋巴细胞在 肿瘤组织所有细胞中的 含量么，但是如上面老师说的，我该怎么去掉细胞碎片呢，我以为圈群已经去掉大部分碎片了~，。、

niwanmao

124895811 发表于 2019-5-6 16:14
我还有最后一个比较重要的疑问哦~
就是 检测TIL的时候，理论上是不是应该检测 肿瘤微环境 里面T淋巴细胞  ...

如果你希望计算T细胞占所有有核细胞的比例，那么最好加个syto之类的无需破膜的核酸染料，将碎片和有核细胞区分开。

124895811

niwanmao 发表于 2019-5-6 17:40
如果你希望计算T细胞占所有有核细胞的比例，那么最好加个syto之类的无需破膜的核酸染料，将碎片和有核细 ...

谢谢老师，我查查资料试试先~