PI染色圈活细胞流式设置步骤

小哈happy哈

本人实在流式刚入门，具体操作不是很懂，我想用FITC标记的一个抗体测细胞表面的表达，文献中染完细胞在上机前用PI圈了一下细胞，这一步我不知道要怎么圈，是单独画一个横坐标是PI，纵坐标是COUNTS的图，然后用Blank组调PI的电压，使其所有的都在10的一次方以内，给药组的话就是电压在10的一次方以内算活细胞吗我测FITC标记的抗体用调补偿吗，可以怎么调呢，下面一个图是我自己想象着测的步骤，烦请老师同学帮忙看看这样对吗

niwanmao

看表达确实是新手，整段看下来，就没看懂你的表述

我不知道你要检测的是什么指标，分析FITC这个标记表达，很简单，用FSC-A/FSC-H排除粘连体，然后在FSC/SSC上排除碎片，再接着用PI/FSC排除死细胞，最后分析FITC标记的表达。用直方图还是散点图，都不是问题，问题关键在于要用Fc Block或生物学阴性对照设置阴性和阳性分界。这些概念论坛里面都能搜的到。

小哈happy哈

niwanmao 发表于 2019-5-21 08:27
看表达确实是新手，整段看下来，就没看懂你的表述

我不知道你要检测的是什么指标，分析FITC这个标记表达 ...

哦哦，老师的回答很专业，我大概懂了一点点，还想问一下，排除粘连体和死细胞，最后分析FITC表达可以测完了在FlowJo上分析吗，还是我在上机测的时候就要圈好呢，谢谢老师！

私学者

小哈happy哈 发表于 2019-5-21 09:44
哦哦，老师的回答很专业，我大概懂了一点点，还想问一下，排除粘连体和死细胞，最后分析FITC表达可以测完 ...

步骤没有问题，圈门最好设定一个完全阳性对照