PBMC里面有多少TH1,TH2,TH17?

cellprobe

PBMC里面有多少TH1,TH2,TH17?
谢谢。能检测的到吗？

niwanmao

辅助T基本上都是这三大亚群为主的啊，像其它Th9、Th22都是含量更少的。
以CD4＋T设门，三个亚群都是比较明显的。

cellprobe

niwanmao 发表于 2019-5-29 10:05
辅助T基本上都是这三大亚群为主的啊，像其它Th9、Th22都是含量更少的。
以CD4＋T设门，三个亚群都是比较明 ...

倪老师，我们的实验是这样的，我们设想有一种免疫抑制细胞可以抑制Th1/Th2/Th17。Th1我们检测CD4+IFN-r, Th2我们检测CD4+IL-4，Th17我们检测CD4+IL-17.
我先用pan-T试剂盒分选外周血中的T细胞，再和抑制性免疫细胞共培养。我不知道天然PBMC里面这些细胞的比例是多少？是直接拿T细胞和免疫抑制性细胞共培养，还是分别把T细胞分化成Th1/Th2/Th17后再和抑制性免疫细胞共培养？

stf1990

cellprobe 发表于 2019-5-29 10:31
倪老师，我们的实验是这样的，我们设想有一种免疫抑制细胞可以抑制Th1/Th2/Th17。Th1我们检测CD4+IFN-r,  ...

我更倾向于后者，但是楼主如何把Th1／Th2／Th3单独分离出来呢？这个用一般的磁珠不行吧

cellprobe

stf1990 发表于 2019-5-29 18:02
我更倾向于后者，但是楼主如何把Th1／Th2／Th3单独分离出来呢？这个用一般的磁珠不行吧 ...

细胞因子和抗体诱导。

niwanmao

cellprobe 发表于 2019-5-29 10:31
倪老师，我们的实验是这样的，我们设想有一种免疫抑制细胞可以抑制Th1/Th2/Th17。Th1我们检测CD4+IFN-r,  ...

比例可参考我之前发过的帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7026-1-1.html
至于验证方法，两种方法均可，因为正常情况下还是高的，足够你验证。

cellprobe

niwanmao 发表于 2019-5-29 22:23
比例可参考我之前发过的帖子：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-7026-1-1.html
至于验证方法，两种方法 ...

倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以用FACS检测IFN-r/IL-4/IL-17吗？还是天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用PMA+Ionomycin+高尔基体抑制剂处理，就可以用FACS检测IFN-r/IL-4/IL-17吗？ 用CD3/CD28处理以后，还要再用PMA+Ionomycin刺激吗？谢谢！！！

niwanmao

cellprobe 发表于 2019-5-29 23:43
倪老师，天然PBMC里面分离得到的T细胞，用CD3+CD28磁珠激活培养几天后，再用高尔基体抑制剂处理，就可以 ...

两种刺激手段二选一。

cellprobe

niwanmao 发表于 2019-5-30 09:17
两种刺激手段二选一。

用CD3+CD28刺激以后，就不再需要PMA刺激了是吗？我用CD3+CD28刺激几天以后，再用高尔基体处理几个小时，就能检测IFN对吧？

niwanmao

cellprobe 发表于 2019-5-30 09:57
用CD3+CD28刺激以后，就不再需要PMA刺激了是吗？我用CD3+CD28刺激几天以后，再用高尔基体处理几个小时， ...

因为你需要完美控制细胞分化，所以建议按照这个帖子的刺激方案：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=716