流式细胞仪检测细胞死细胞和活细胞占的比例

Ollie · 发表于 2019-6-11 16:57:40

实验对象为海洋裸甲藻，想看一下处理样品中死细胞和活细胞各自占的比例，百度发现PI单染流式细胞仪可以检测，但不知道具体还怎么测？有没有具体的步骤可以借鉴，谢谢

niwanmao · 发表于 2019-6-12 10:31:06

藻类测死活？这个没试过。你直接用低浓度PI染料染不出来吗？

Ollie · 发表于 2019-6-13 21:16:25

谢谢老师，我前几天在资料里看到您分享的PI单染测细死细胞的那个步骤了，我准备试一下，过几天做完之后再与老师分享

niwanmao · 发表于 2019-6-13 22:16:30

Ollie 发表于 2019-6-13 21:16
谢谢老师，我前几天在资料里看到您分享的PI单染测细死细胞的那个步骤了，我准备试一下，过几天做完之后再与 ...

好的。

Ollie · 发表于 2019-6-17 21:51:03

老师，我今天测了处理六小时的，从图上看，对照就死了很多，不知道是不是我这批藻不行。老师不固定是不是会死的比较快？

niwanmao · 发表于 2019-6-18 14:17:15

Ollie 发表于 2019-6-17 21:51
老师，我今天测了处理六小时的，从图上看，对照就死了很多，不知道是不是我这批藻不行。老师不固定是不是会 ...

你的染色步骤是？

Ollie · 发表于 2019-6-19 11:11:28

1500g离心，用200ul PBS悬浮，加1u l PI混匀转入流式管，然后测

niwanmao · 发表于 2019-6-19 16:12:54

Ollie 发表于 2019-6-19 11:11
1500g离心，用200ul PBS悬浮，加1u l PI混匀转入流式管，然后测

藻类的离心速度我不清楚多少合适，你可以摸索一下。
PI浓度不要太高，终浓度在5ug/ml左右。
染色时间2分钟，不要超出太久。
不过还有一个非常重要的问题，你们用的藻类里面有没有藻红素蛋白，如果有的话，就不能用PI了，因为藻红素蛋白会发自主荧光，与PI通道一样，得改用hoechst紫外染料。

Ollie · 发表于 2019-6-19 16:21:15

嗯嗯好的老师，我查一下

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