关于切碎片补偿微球和面积因子的问题

945860216xy

在做多色实验建立模板的时候有一个问题一直比较困惑，在建立模板的时候，为了进一步提高信号准确度，一般都会调节面积因子，使各个荧光信号和前侧向信号的A和H的mean值保持一致，但是调过面积因子后，整个细胞群体会逐渐压缩在一起，为了不把细胞碎片和正常细胞压缩在一起，需要把FSC阈值调的比较高以完全切除碎片，但在使用补偿微球做补偿的情况下，高阈值会把微球群体也切掉，这种情况应该怎么办。机器是BD canto II。

niwanmao

把A和H调到一致，好像没有必要吧，这样调了之后，虽然调宽了H，但反而把原来分布较宽的A给压窄了。

我想成大牛

我不知道可不可以这样，微球调节补偿时调低FSC的阈值，获取样本时再调回来。

945860216xy

我想成大牛 发表于 2019-7-11 17:21
我不知道可不可以这样，微球调节补偿时调低FSC的阈值，获取样本时再调回来。 ...

调完补偿后前面的参数已经不可修改了

我想成大牛

945860216xy 发表于 2019-7-12 10:04
调完补偿后前面的参数已经不可修改了

可是DIVA的补偿面板与阈值面板不在一起啊？阈值的变化会导致补偿的变化吗？

945860216xy

我想成大牛 发表于 2019-7-12 10:51
可是DIVA的补偿面板与阈值面板不在一起啊？阈值的变化会导致补偿的变化吗？ ...

是不在一起，但是模板应用了补偿后阈值这一栏变成不可修改状态了

945860216xy

niwanmao 发表于 2019-7-13 16:37
把A和H调到一致，好像没有必要吧，这样调了之后，虽然调宽了H，但反而把原来分布较宽的A给压窄了。 ...

额，这样啊。但是BD的操作说明书里推荐这一项，这个操作具体有什么好处呢，这样看来反而不如不调啊

niwanmao

945860216xy 发表于 2019-7-15 10:22
额，这样啊。但是BD的操作说明书里推荐这一项，这个操作具体有什么好处呢，这样看来反而不如不调啊 ...

不要调。

maluqi

niwanmao 发表于 2019-7-16 08:14
不要调。

倪老师，您好！
请教您：最近做TBNK绝对计数，发现调整CD45-Percp-Cy5.5的域值后，微球的数量变化很大，这是什么原因？电压、补偿条件、微球管批号、试剂等完全一样的，没有设置其他通道的阈值，是同一个标本，就把CD45-Percp-Cy5.5的阈值降低后，发现微球数量明显减少，一直想不通为何，请倪老师指教，谢谢！

niwanmao

maluqi 发表于 2019-7-30 16:46
倪老师，您好！
请教您：最近做TBNK绝对计数，发现调整CD45-Percp-Cy5.5的域值后，微球的数量变化很大， ...

阈值尽量用FSC。我以前也试过用荧光参数做阈值，发现信号会少很多。
另外，你可以把两个文件做出相同的散点图做一下对比。