CD45-PerCP-Cy5.5染色时，染色碎片过多

zhangjuanLAY

求教~~用CD45-PerCP-Cy5.5免洗方法（先标记，后溶血）处理样本后测试，自制的试剂：细胞碎片信号强，且数量多的情况，而BD的试剂没有，不同血样多次测试都是这样的结果，这是什么情况？？

tiger

是自制的裂解液吗？效果不错。把阈值放到FL3上

zhangjuanLAY

tiger 发表于 2019-8-2 17:21
是自制的裂解液吗？效果不错。把阈值放到FL3上

是商品化的裂解液。我没明白为什么同样的阈值，自制的染液，碎片占比会那么大

niwanmao

zhangjuanLAY 发表于 2019-8-3 09:29
是商品化的裂解液。我没明白为什么同样的阈值，自制的染液，碎片占比会那么大 ...

从图形分布上无差异，不知道你阈值调在哪个通道，建议设到充分排除大多数碎片的时候，就不会有差异了。

zhangjuanLAY

niwanmao 发表于 2019-8-3 10:53
从图形分布上无差异，不知道你阈值调在哪个通道，建议设到充分排除大多数碎片的时候，就不会有差异了。 ...

阈值调节后是这样的，但感觉把阈值调到5000 不能从根本上 解决问题C:\Users\urit\Desktop

tiger

zhangjuanLAY 发表于 2019-8-5 12:29
阈值调节后是这样的，但感觉把阈值调到5000 不能从根本上 解决问题

不同的阈值，淋巴细胞的比例怎么差异这么大？请把数据传上来。

SAKURA

因为淋巴细胞的比例是占所有事件的比例，阈值不同，收集的碎片不一样即事件数不同

tiger

SAKURA 发表于 2019-8-6 13:35
因为淋巴细胞的比例是占所有事件的比例，阈值不同，收集的碎片不一样即事件数不同 ...

你看一下粒淋比

niwanmao

zhangjuanLAY 发表于 2019-8-5 12:29
阈值调节后是这样的，但感觉把阈值调到5000 不能从根本上 解决问题

前两组不是对上了吗？
最后一组对不上，是因为5000已经开始把粒细胞排除掉了，两者排除的粒细胞数量不同。
我个人是不建议用荧光通道作为阈值通道的，一般还是用FSC更好点。

我想成大牛

CD45染色时，淋巴细胞左侧一般会有一个小群，@niwanmao SSClowCD45dim的细胞是嗜碱性粒细胞吗？为什么他的图上看不见呢？