ROS双峰问题

sam

实验背景：

一共设置6组,空白组，CON组，LPS组和三个浓度中药组；检测ROS水平

问题描述：

分析数据总发现有两个或多个峰，不平滑。细胞碎片并不多，已经将其圈出门外。

请问老师下图1中的这种结果是否正常可用？如不正常应该如何改进？本实验是否可以按照Geo-mean值对结果进行分析？

图1分析结果

下图2：未染色空白组的原始文件（左下角是PC5.5通道，右下角是FITC通道）

图2空白组

下图3：

是

LPS

刺激组的原始文件

（左下角是

PC5.5

通道，右下角是

FITC

通道）

图3LPS刺激组

下图4：是只加染料对照组的原始文件（左下角是PC5.5通道，右下角是FITC通道）

图4对照组

niwanmao

sam 发表于 2019-8-4 14:13
谢谢老师，我不知道这么理解对不对。
以CON组划门，然后以门以外的百分比进行判断结果阳性率。
下面第一 ...

拖尾影响设门，建议放在10E4位置。

niwanmao

以前有人问过：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4126-1-1.html
另外，不晓得你用的是什么染料？

sam

niwanmao 发表于 2019-8-3 11:22
以前有人问过：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4126-1-1.html
另外，不晓得你用的是什么染料？ ...

谢谢老师回复，我之前有看过这个帖子；
我用的染料是DCFH-DA，碧云天的试剂盒。
我比较疑问的是：
1.如果结果是正常的话，这个图是直接可以用到文章的吗？
2.我感觉我的左锋很高，不知道是什么原因？
3.出现双峰是因为有两个细胞群吗？
4.我不知道我上面图片中设置未染色组，对照组和刺激组对不对？
谢谢老师

niwanmao

sam 发表于 2019-8-3 13:47
谢谢老师回复，我之前有看过这个帖子；
我用的染料是DCFH-DA，碧云天的试剂盒。
我比较疑问的是：

从你问题来看，你应该是没看过我前面贴的这个链接内容，我上面附了一篇Nature文献的图。
你只需分析阳性率即可。

sam

niwanmao 发表于 2019-8-4 10:25
从你问题来看，你应该是没看过我前面贴的这个链接内容，我上面附了一篇Nature文献的图。
你只需分析阳性 ...

谢谢老师，我不知道这么理解对不对。
以CON组划门，然后以门以外的百分比进行判断结果阳性率。
下面第一个图是我做的三个以CON组划门的图；另外请教老师Geo-mean值的话是看整个FITC通道的吗？（是按照我第二个图这样统计吗？）
谢谢老师

图2

图1

sam

niwanmao 发表于 2019-8-4 16:27
拖尾影响设门，建议放在10E4位置。

谢谢老师，这个以Geo-mean值计算结果可以吗？请问Geo-mean是按照FITC算还是FITC-A+算呢？（是按图中1,2,3哪一种计算呢？）

hwthwt

个人认为从Unstained管看你的FITC通道电压有点高，应该调低一点

tiger

sam 发表于 2019-8-4 21:40
谢谢老师，这个以Geo-mean值计算结果可以吗？请问Geo-mean是按照FITC算还是FITC-A+算呢？（是按图中1,2,3 ...

估计是坏死细胞太多，造成阳性细胞太少，建议重做，这样的结果会遭到审稿质疑的。

sam

hwthwt 发表于 2019-8-6 07:17
个人认为从Unstained管看你的FITC通道电压有点高，应该调低一点

好的 谢谢