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[细胞周期] 流式能够检测细胞的DNA含量发生变化?

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发表于 2019-8-15 16:05:48 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏4流星未解决
大家好,请问流式能够检测细胞DNA含量变化吗?如果有对照的话,看相对荧光强度可以吗?还有就是使用倍性分析的话能不能看峰图的移动来确定DNA含量的变化?求大神支招!万谢!@niwanmao

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发表于 2019-8-16 07:38:32 | 显示全部楼层
用PI或7-AAD等核酸染料就可以了。参照细胞周期的染色,论坛里有很多教程
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发表于 2019-8-16 08:23:20 | 显示全部楼层
正常人静止体细胞有46条染色体,相当于7.10-12 pg DNA/细胞核,我们称之为二倍体细胞,而正常增殖细胞则存在不同的DNA含量。在细胞周期(G0,G1,S,G2 ,M)的各个时期,DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化:在G1期,细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体;进入S期后,DNA开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1和G2期之间;当DNA复制结束成为4倍体时,细胞进入G2期,G2期细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M期,因此,单纯从DNA含量无法区分G2期和M期;一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个子细胞,这两个子细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1,S,G2/M期。
通过核酸染料标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%,S%及G2/M/%,了解细胞的增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。正常细胞具有较恒定的DNA含量,而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来,这一指数对于肿瘤的早期诊断,交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅助指标。
应该注意的是,只有在染色体数目的变化带来的DNA含量差异可被检测时,才可能有DNA异倍体的检出。因此DNA含量的不异常不能除外恶性或染色体异常的存在。另外,正常细胞在衰老过程中的多倍体化以及肿瘤治疗后导致的DNA含量的增加、凋亡和坏死导致的DNA含量降低都是在分析DNA直方图时需要考虑的因素。
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 楼主| 发表于 2019-8-16 14:46:40 | 显示全部楼层
sunzheng_99 发表于 2019-8-16 08:23
正常人静止体细胞有46条染色体,相当于7.10-12 pg DNA/细胞核,我们称之为二倍体细胞,而正常增殖细胞则存 ...

谢谢您的解答,感觉明白了许多。还是有很多疑问,如果您知道麻烦解答一下。我的四膜虫细胞是说45倍体,有121条染色体,由于某个基因敲掉怀疑其DNA含量发生变化,由于倍性这么大,DNA含量如果发生微弱的变化应该看不出来对吗?您说的分析DNA直方图怎么做呢?
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发表于 2019-8-16 19:21:52 | 显示全部楼层
liuyongqiang 发表于 2019-8-16 14:46
谢谢您的解答,感觉明白了许多。还是有很多疑问,如果您知道麻烦解答一下。我的四膜虫细胞是说45倍体,有 ...

如果你需要测DNA含量,这个方法在植物学上是做的比较多的。
可以采用几种已知DNA含量的细胞,进行核酸染色,做出标准曲线,然后再测未知含量的细胞,通过其荧光值反推DNA含量。
也可以直接拿已知DNA含量的细胞作为内参,与待测样本混合,根据DNA含量对比,计算出含量变化。
20190816_191913.png


但是如果只是基因敲除的话,是测不出DNA含量变化的。只有染色体数量发生明显变化的时候才行。
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 楼主| 发表于 2019-8-18 20:01:39 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-16 19:21
如果你需要测DNA含量,这个方法在植物学上是做的比较多的。
可以采用几种已知DNA含量的细胞,进行核酸染 ...

谢谢老师,感觉收获很大!
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发表于 2024-9-23 15:27:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-8-16 19:21
如果你需要测DNA含量,这个方法在植物学上是做的比较多的。
可以采用几种已知DNA含量的细胞,进行核酸染 ...

倪老师好!您贴图的这个文献全文能分享一下吗?
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