CD3/28刺激脾脏细胞后FACS染不出CD3

土星人

小鼠脾脏淋巴细胞

对照组直接培养，另一组直接加入 anti-CD3（2ug/ml）anti-CD28 (1ug/ml) 培养

48hr后镜下可见加了抗体刺激组形成多个小团簇状，应该是激活了，上流式染色却没有CD3阳性的细胞！

对照组很明显有CD3+细胞。

为什么呢？

niwanmao

土星人 发表于 2019-8-23 15:19
那用这种方法刺激淋巴细胞后就不能检测淋巴细胞亚群了是吧？
我想做体外激活淋巴细胞的实验，那用什么方 ...

@tiger  说的对，你检测CD3的抗体需要避免与刺激抗体结合同一表位。
例如，Gli3 in fetal thymic epithelial cells promotes thymocyte positive selection and differentiation by repression of Shh也是用跟你一样的CD3去刺激，用的是Biolegend的anti-CD3FITC (catalogue no. 100204)。
如果你确定还是做不好CD3，那么就改用常见的PMA+离子霉素吧

土星人

我用的激活抗体分别是：CD3e Monoclonal Antibody (145-2C11), Functional Grade, eBioscience™ from Thermo Fisher Scientific, catalog # 16-0031-82
Invitrogen Anti-CD28 Monoclonal (37.51), eBioscience™, Catalog # 16-0281-82.

tiger

土星人 发表于 2019-8-23 15:11
我用的激活抗体分别是：CD3e Monoclonal Antibody (145-2C11), Functional Grade, eBioscience™ from Ther ...

因为CD3检测表位被刺激抗体CD3封闭了。

土星人

tiger 发表于 2019-8-23 15:17
因为CD3检测表位被刺激抗体CD3封闭了。

那用这种方法刺激淋巴细胞后就不能检测淋巴细胞亚群了是吧？
我想做体外激活淋巴细胞的实验，那用什么方法可以做阳性对照组呢？

土星人

我用的两个抗体的确是同一个克隆号，而Biolegend那个是另一个克隆号。非常感谢！

土星人

niwanmao 发表于 2019-8-23 15:00
@tiger  说的对，你检测CD3的抗体需要避免与刺激抗体结合同一表位。
例如，Gli3 in fetal thymic epithel ...

我用的两个抗体的确是同一个克隆号，而Biolegend那个是另一个克隆号。非常感谢！