小鼠外周血裂解后散点图淋巴细胞区有2群？

WJHUANG · 发表于 2019-8-28 09:55:55

本帖最后由 WJHUANG 于 2019-8-28 09:55 编辑

最近尝试一款红细胞裂解液（含固定剂）裂解小鼠全血，本来这款红细胞裂解液是针对人血的，因需要测试小鼠外周血样本故尝试裂解了一下，先采用FITC-CD3，apc-CD64，PE-CD11B标记全血，然后采用裂解液裂解全血1min，加PBS后离心，PBS清洗一次后上机检测。
结果发现裂解效果还行，但是淋巴细胞区却有2群细胞，不知道右边那一群是什么，血小板？而且比例还不低。求大神解惑
图片上可以看到，俩群细胞分群虽然相隔很近但还是很明显，且右边那群淋巴细胞比低很多，不知道是什么？

WJHUANG · 发表于 2019-8-28 10:01:07

求大神解惑，分群太奇怪了，而且分群还比较明显，染色也有差异。

niwanmao · 发表于 2019-8-28 21:39:57

这样看来应该左侧这群才是淋巴，右侧这群只是有部分淋巴混入的单核吧

Cleopatra · 发表于 2019-8-29 09:40:20

我的人的PBMC也是这样分两群，但是我的以右侧群数量居多，请问最后圈淋巴细胞门是都圈呀，还是圈左侧群？

WJHUANG · 发表于 2019-8-29 10:37:03

Cleopatra 发表于 2019-8-29 09:40
我的人的PBMC也是这样分两群，但是我的以右侧群数量居多，请问最后圈淋巴细胞门是都圈呀，还是圈左侧群？ ...

最好做个标记验证区分一下，可以用CD3标记一下，我之前人的也遇到过这个问题，后来增加时间就只有一群了，你是用的什么裂解的

WJHUANG · 发表于 2019-8-29 10:41:13

niwanmao 发表于 2019-8-28 21:39
这样看来应该左侧这群才是淋巴，右侧这群只是有部分淋巴混入的单核吧

感觉不像是单核细胞，我用CD64标记的单核细胞，显示主要在上面一点，就是红色的部分。感觉像是另外一种淋巴细胞似的，CD3比例低很多

Cleopatra · 发表于 2019-8-29 10:42:53

我是用先密度梯度离心，然后再裂红，CD3marker是肯定会加，但是我需要加因子活化测胞内因子，最后上机的时候发现有两群，所以就不清楚是分的原因，还是加因子的原因。请问增加时间是增加多久呀？我裂红室温7min

潘潘杰 · 发表于 2019-8-29 20:37:02

我也觉得ficoll离心后，再破红好点啊，不然一直裂一直有

WJHUANG · 发表于 2019-9-5 17:14:19

Cleopatra 发表于 2019-8-29 10:42
我是用先密度梯度离心，然后再裂红，CD3marker是肯定会加，但是我需要加因子活化测胞内因子，最后上机的时 ...

那应该是刺激后导致部分细胞活化，部分细胞没有，那样细胞很容易出现分群，我们这边做脾脏淋巴细胞经常会遇到，也有可能是死细胞，与活细胞分群。

WJHUANG · 发表于 2019-9-5 17:20:06

Cleopatra 发表于 2019-8-29 10:42
我是用先密度梯度离心，然后再裂红，CD3marker是肯定会加，但是我需要加因子活化测胞内因子，最后上机的时 ...

你这个不适用，多半是刺激的原因，我之前做的分群猜测可能是固定剂（含有固定成分的红细胞裂解液）原因，部分细胞固定不充分，导致分群，固定充分后就没有了。你可以试着看俩群细胞胞内因子的比例，有差异的话极有可能是刺激活化的原因了

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