帮忙看看做的这个凋亡，补偿调不好，FITC单染没有正常细....

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-3 12:32:31

用PI和Annexin-FITC-做了一个精子细胞的凋亡实验，调节补偿的时候PI还可以，FITC的没有正常细胞群，两个的电压差别也很大，做出来的检测管分群也不太好，使用的是索莱宝的试剂盒。附件里是做的FCS文件，哪位高手能指点一下，补偿这块该怎么调，实验问题出在哪？

niwanmao · 发表于 2019-9-3 22:47:53

是否可把图直接放出来？
第一个图FSC/SSC，第二个图AV/PI

hwthwt · 发表于 2019-9-4 07:58:35

calibur没法离线调补偿，建议你上机的时候慢慢调

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-4 09:23:48

niwanmao 发表于 2019-9-3 22:47
是否可把图直接放出来？
第一个图FSC/SSC，第二个图AV/PI

倪老师，PDF里是流式图，你帮我看一下

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-4 09:24:58

hwthwt 发表于 2019-9-4 07:58
calibur没法离线调补偿，建议你上机的时候慢慢调

FITC细胞群位置差很多，动电压的话PI又显示不出来了

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-4 09:26:26

小小一铁匠发表于 2019-9-4 09:24
FITC细胞群位置差很多，动电压的话PI又显示不出来了

会不会和实验条件有关系，正常细胞群应该位置都差不多才对啊

niwanmao · 发表于 2019-9-5 09:07:16

小小一铁匠发表于 2019-9-4 09:23
倪老师，PDF里是流式图，你帮我看一下

PDF在哪里？

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-5 15:53:34

倪老师，这个是流式图

小小一铁匠 · 发表于 2019-9-5 15:54:17

niwanmao 发表于 2019-9-5 09:07
PDF在哪里？

主要没搞懂同样处理，上样的时候仪器电压怎么会差那么多

niwanmao · 发表于 2019-9-8 23:02:43

小小一铁匠发表于 2019-9-5 15:54
主要没搞懂同样处理，上样的时候仪器电压怎么会差那么多

这不叫电压相差那么大。电压你不应该变动的，准确的说是FITC向右偏了，这很正常。
把补偿调好，就可以设十字门了，不需要关注其与单阳性样本的偏移。
事实上，Annexin V/PI的双染样本，没必要做单阳性参照就能直接调了。

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