多聚甲醛固定后不能裂解红细胞

jingweis530 · 发表于 2011-1-14 16:48:25

最近准备开一个临床的项目：血小板-白细胞聚集体的检测，按照文献说抽血后要用1%终浓度的多聚甲醛固定，然后标记抗体，然后裂解红细胞，再用多聚甲醛固定，待上机。但我发现，用多聚甲醛固定后，红细胞不能裂解（用的是BD裂解液），没有固定的就裂解得很好，想请教老师怎么解决这个问题，万分感谢！

niwanmao · 发表于 2011-1-14 16:48:26

多聚甲醛固定后的确很难裂解，可以尝试一下离心后，再用氯化铵裂解液试试。
另外，步骤我建议你参考current protocol in cytometry中的相关章节，这本书比较权威：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... D%E7%BB%86%E8%83%9E

jingweis530 · 发表于 2011-1-17 16:08:33

非常感谢老师的指导，按照指导再摸索一下。

jingweis530 · 发表于 2011-1-21 17:49:49

经老师指点，我固定后用PBS洗一遍，再裂解就非常完全了，谢谢老师指教。

chujindong · 发表于 2011-1-27 20:45:19

这么好，留着以后看看，碰到这问题的话也这么解决

wangyekai · 发表于 2011-3-10 11:13:40

我们都直接标CD45，把CD45的阈值打高删掉红细胞，懒得裂解红细胞了！

niwanmao · 发表于 2011-3-10 11:20:04

我们都直接标CD45，把CD45的阈值打高删掉红细胞，懒得裂解红细胞了！
wangyekai 发表于 2011-3-10 11:13

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一般情况下这是没有问题的，但如果白血病免疫分型时做到了M6，你就可能把原始或幼稚红细胞给忽略掉，而且也可以把一些浆细胞疾病给忽略掉了。所以也不建议这样做。

wangyekai · 发表于 2011-3-21 08:14:40

一般情况下这是没有问题的，但如果白血病免疫分型时做到了M6，你就可能把原始或幼稚红细胞给忽略掉，而且 ...
niwanmao 发表于 2011-3-10 11:20

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恩，对，特殊血液疾病我们应该特殊对待

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