一个肺泡灌洗液样本的处理和上机结果

niwanmao

肺泡灌洗液是呼吸科疾病非常重要的样本类型，与血液科疾病需要骨髓一样不可或缺，但由于灌洗后存在絮状物，疑与气管内粘液有关，给处理带来不少麻烦。 通常，很多文章会建议用DTT预处理后，再用纱布过滤，但是DTT这个东西我曾经用全血样本做过几个浓度梯度的测试，发现浓度稍微高一些就容易使血样变黑，因此不排除对结果会有影响（尽管没有明确的对比）。 因此，8月31日呼吸科医生送来的肺泡灌洗液样本，我毫不犹豫地采用了魔滤®（Magic Filter®）＋魔杵®（Magic Vajra）组合进行机械解离。 观察肺泡灌洗液，一共约5ml，大部分澄清，中间悬浮着白色絮状物，我们需要的细胞就是液体和絮状物中，因此，必须将絮状物机械解离成单细胞。我们将样本轻轻混匀，然后用1ml枪头吸取1ml样本注入置于流式管上的魔滤中，很快，其中的澄清液体通过魔滤底部的滤网滤入流式管，絮状物留在魔滤滤网上，用镊子将其挪至侧壁，用魔杵迅速研磨数下，接着用含BSA的PBS冲洗一下，对着光一看，魔滤侧壁和底部的絮状物完全消失，这是否意味着细胞解离成功，并且细胞完整性保持良好？

不急，先离心浓缩吧，500×g离心去上清，以200ul含BSA的PBS重悬，记录浓缩比例（浓缩5倍），接着染色上机吧。由于患者诊断上怀疑过敏性肺泡炎，所以临床上需要了解其淋巴亚群组成，通过T、B、NK比例及数量了解肺泡局部的免疫环境，从而推测病因，所以咱们就做个简单的淋巴亚群7项吧。 因为没有红细胞所以无需裂解，20分钟后加入绝对计数微球，混匀，上机一看，好家伙，漂亮，分群好，与临床诊断符合：


这次虽然是第一例用魔滤＋魔杵处理的肺泡灌洗液，但是这个结果给了我们充分的信心，我们能够非常好地利用魔滤＋魔杵套装保证处理后的单细胞悬液质量。后续，我们会继续肺泡灌洗液的免疫细胞组成的探索，给呼吸科疾病的免疫微环境检测带来有力解读。
当然，处理这类样本的方法还有很多种，例如你也可以用针筒底在滤网上直接磨，或者用其它粘液处理试剂处理，此处仅分享我们的经验，仅供参考。

tiger

请问阈值是设在CD45上吗？

niwanmao

tiger 发表于 2019-9-17 16:27
请问阈值是设在CD45上吗？

阈值是FSC

tiger

niwanmao 发表于 2019-9-17 19:13
阈值是FSC

样品处理超棒，杂细胞很少。

疯疯道人

请问老师小鼠肺组织的淋巴亚群7项有办法做吗？

niwanmao

疯疯道人 发表于 2019-9-18 13:06
请问老师小鼠肺组织的淋巴亚群7项有办法做吗？

肺组织可以先按照上述的机械法看看，但是多数情况下得率会偏少。我个人的建议是先用胶原酶短时间消化后再进行机械研磨，既可避免酶消化影响抗原表达，又可增加得率。

疯疯道人

niwanmao 发表于 2019-9-18 13:42
肺组织可以先按照上述的机械法看看，但是多数情况下得率会偏少。我个人的建议是先用胶原酶短时间消化后再 ...

好，非常感谢老师

lch198118

老师，您好！请问你所用的魔滤和魔杵是什么？国内有销售的吗？

niwanmao

lch198118 发表于 2019-9-18 16:20
老师，您好！请问你所用的魔滤和魔杵是什么？国内有销售的吗？

这是我们自己研发的一种耗材，可通过我们流式中文网的网店购买

                               
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2017jinhua

倪老师肺泡灌洗液标本淋巴亚群和细胞因子能放到第二天做吗？能得话怎么保存合适啊？