这种漂亮的抗体滴定结果图，你会做吗？跟我一步步做吧

niwanmao

做流式实验之前，抗体的滴定不可或缺。临床有时候或许可以凭经验，但科研中的指标，滴定这一步不建议跳过。说明书中最后一般都写着『 It is recommended that the reagent be titrated for optimal performance for each application.』

滴定的重要性和步骤，在此不多赘述，请参考既往的帖子：

• 实例告诉您，为什么抗体滴定这么重要？
• 〖你问我答〗滴定的目标是什么？
• 抗体的滴定方法（推荐，非常重要）
• 直标抗体和间标抗体的滴定步骤
  

在滴定的结果展示上，我们有时候看到下面这种美图：



曾经有站友问过我，当时我还无法回答，现在我可以放心出来教大家怎么做这种滴定图了。
1、打开FlowJo软件，建立一个Group，然后将滴定的若干个FCS数据文件拖入该Group，并按照滴定浓度从阴性、低浓度、高浓度这样排列。
2、对各个滴定数据进行逐级设门，例如我们依次设置Cells－Single Cells－Live－Negative和Positive，每个数据都用同样的门模板。
3、选择Live这个节点，然后从Edit面板中点击”Select Equivalent Nodes“，可选择同组中所有相同名称的节点：


4、在File面板，选择Export/Concatenate按钮下拉菜单Export/Concatenate Populations：


5、在弹出的窗口中，点Concatenate面板，在Destination中选择目标路径，点开Advanced，录入后缀，最后点击Concatenate按钮，将这一组数据的Live门事件导出到一个数据文件中：


6、导出完成后，会跳出下面这样一个对话框，你可以选择新建工作空间打开新的数据，也可以在已有的工作空间打开这个导出的新数据：


7、最后一步就是振奋人心的时刻了，打开汇总后的新数据里面Live门事件，然后纵坐标选择IgD（本次演示的抗体名称）、横坐标选择SampleID，即可在一个散点图中展示各个滴定数据中IgD的分群变化了，一目了然看出滴定结果：


本文图片来源：UWCCC Flow Cytometry Laboratory网站

派大star

老师，请问一下concatenate 出现error unkown怎么解决？

一席繁荒

倪老师您好，请问抗体滴定是不是与所用细胞的类型也有关系呀。比如我做抗体滴定的时候用的一种细胞做出来最佳抗体浓度，下次我换个不同类型的细胞需要进行抗体滴定实验吗？谢谢倪老师

Yooooo

老师好，老师的这个图例，看着好像分群都挺明显的啊，哪个条带才是最合适的分群啊？

zhang4083

倪老师，做抗体滴定时候，用FC阻滞剂吗？我看文献中，有的用，有的干脆不用。