植物GFP检测

wangtinger

各位老师，有没有用流式做过植物GFP的检测，具体步骤能不能分享一下。需要订购什么试剂，如何获得单细胞呢，缓冲液是什么。谢谢

niwanmao

不是很理解什么意思，是植物细胞转染GFP？那直接测就行了呀。

a86856635

植物因为细胞壁的存在，不容易制成单细胞，所以最合适的方法还是切片进行显微镜观测。比较薄的组织也可以直接观测到。如果一定要跑流式只能制备原生质体后检测。

wangtinger

niwanmao 发表于 2019-9-22 17:12
不是很理解什么意思，是植物细胞转染GFP？那直接测就行了呀。

老师，是的，转染了GFP。怎么获得单细胞呢

wangtinger

a86856635 发表于 2019-9-23 08:24
植物因为细胞壁的存在，不容易制成单细胞，所以最合适的方法还是切片进行显微镜观测。比较薄的组织也可以直 ...

老师，怎么制备呢

niwanmao

wangtinger 发表于 2019-9-23 08:50
老师，怎么制备呢

咦，你们转染不是制备成单细胞之后转的？整株植物你们就能转进去？

制备的话，我目前没看到比较权威的方法，文献中似乎仍又机械法为主：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5793201/。对于植物，我知道机械法可能容易导致细胞破碎，但可能也没办法。

a86856635

wangtinger 发表于 2019-9-23 08:50
老师，怎么制备呢

需要一些酶消化细胞壁，高渗条件下处理样品，植物细胞通常偏大，仪器最好也要选择上扬针粗点的仪器。具体细节还是要参考文献，不同的组织处理方法也会有不同吧。

a86856635

niwanmao 发表于 2019-9-23 09:13
咦，你们转染不是制备成单细胞之后转的？整株植物你们就能转进去？

制备的话，我目前没看到比较权威的方 ...

吵得天翻地覆的转基因食品怎么来的呢？

niwanmao

a86856635 发表于 2019-9-25 09:48
需要一些酶消化细胞壁，高渗条件下处理样品，植物细胞通常偏大，仪器最好也要选择上扬针粗点的仪器。具体 ...

植物方面不太懂，兄弟提供一个案例给我们学习一下如何？

a86856635

niwanmao 发表于 2019-9-25 14:19
植物方面不太懂，兄弟提供一个案例给我们学习一下如何？

倪老师太客气了，我也只是知道一个大概而已。https://www.sciencedirect.com/sc ... ii/016894528690049X
这有一篇比较早期的文献，可能会有所帮助。