藻细胞膜完整性的相关染色及分析问题请教

yangshu8808

各位好：
      最近在做藻细胞的细胞膜完整性观察，用PI单染，在红光（FL3\FL4）下检测发现空白组与损伤的细胞区别不大。我用的仪器是BD Accuri C6,双激发波长(488+630)，但只有FL1(绿)/2(黄)/3(红)/4(红)四个发射波长的检测通道。后来在仪器培训资料里发现FL2通道可用于检测PI染料的发射波长，因此又分析了FL2-Count的图，但是画门后发现损伤组的确能分出两个峰，但是却是往信号值降低的方向移，相当于总体平均光强反而下降了，这可能是什么造成的？
      另外各位大佬有无展示细胞膜完整性的其他染料和观测波长建议？

niwanmao

只要有两个峰，并且确定是真实而不是非特异信号，就可以用。荧光强度不同问题不大。

yangshu8808

谢谢倪老师的答复！我猜想的是细胞损伤后染色质会受损，所以健康的细胞的染色效果也有所下降，可为什么膜损伤后的细胞与空白组的健康细胞相比荧光强度也是下降的呢？PS：我想上传图片，但是我不明白这个图片地址是什么。

niwanmao

yangshu8808 发表于 2019-9-29 16:04
谢谢倪老师的答复！我猜想的是细胞损伤后染色质会受损，所以健康的细胞的染色效果也有所下降，可为什么膜损 ...

荧光强度降低，跟你的染料用量、细胞数量都有关，所以只要分的开，你不需要纠结这么多。

上传图片，在发帖的时候，编辑窗口工具栏直接就能传。回复的时候，要点编辑框右上的“高级模式”切换到高级状态，再点击工具栏图片按钮。

yangshu8808

好的谢谢老师~那我像这样画门分析的方式可以吗？另外，藻细胞在610-680nm左右有叶绿素的自发荧光，在FL2通道应该全是染色剂引起的特异性荧光。

yangshu8808

niwanmao 发表于 2019-9-29 21:34
荧光强度降低，跟你的染料用量、细胞数量都有关，所以只要分的开，你不需要纠结这么多。

上传图片，在发 ...

老师我这样分析可行吗？(如上楼图中所示)在正常细胞的FL2-Count图的峰尾画线，线右即认为是损伤细胞

niwanmao

yangshu8808 发表于 2019-10-8 13:02
老师我这样分析可行吗？(如上楼图中所示)在正常细胞的FL2-Count图的峰尾画线，线右即认为是损伤细胞 ...

对于这类已经有比较明显峰的分布，我个人倾向于用高斯分布来判断右侧缘与坐标的交叉位置，定为阴、阳性界限（见下图）：