如何判断弱阳性细胞

无知的牧羊人

小白提问。
  目前在检测中，检测出细胞分群。第一个问题，圈门如图所示，是根据实际细胞分群而定，还是根据同型对照来定义？
第二个问题，为什么电压调高后，样本的阴性细胞群荧光信号增强，ISO的细胞荧光强度不变？
第三个问题，怀疑阴性细胞中，有一部门弱阳性的细胞，应该如何设计实验去验证？
希望各位老师能解答一下~

我想成大牛

1. 对于这种分群清晰的群，我觉得按照实际分群圈门比较好。对于你的样本背景增强，a 是否是收完blank后你调高了APC通道的电压？FMO对照要在相同的条件下进行吧;b APC通道的抗体是否使用的浓度太高；c 细胞染色前未使用FcR blocking reagent封闭.
2. 调高通道电压就会使所有的细胞信号增强，包括阴选细胞，所以获取时中间不能调电压。
3. 你的阴阳性群靠的比较进，可以考虑增强阳性群的荧光强度，比如滴定抗体，换荧光素等。至于是否有弱阳性群就不清楚了。

niwanmao

设门，最佳是生物学对照，其次是FMO对照（Fc阻断）。
电压调高后，你这里的阴性和isotype都会增高，只是你用的仪器本身性质导致你觉得不变。
阴性细胞群里面，怎么会包含弱阳性？如果是弱阳性，肯定是超出阴性区域啊，用正确的对照就能比较的出来。

鬼鬼未影

niwanmao 发表于 2019-10-11 21:58
设门，最佳是生物学对照，其次是FMO对照（Fc阻断）。
电压调高后，你这里的阴性和isotype都会增高，只是你 ...

那这么说是阳性群吗

niwanmao

鬼鬼未影 发表于 2019-10-15 10:43
那这么说是阳性群吗

与正确的阴性对照对比，只要冒出头的，就算阳性，只是强弱不等。