CFSE标记T淋巴细胞与7-AAD共染，7-AAD也将CFSE标记的T细胞染上了

Phoenix

最近在做MLR实验，方案如下，CFSE标记T cell,然后与Stimultor cell共培养，FACS检测时发现，7AAD不仅可以标记死细胞，而且也会标记上CFSE标记的T cell，这样就无法判断CFSE-T cell的比例。网上有卖CFSE/7-AAD细胞增殖试剂盒的，请问流式细胞仪如何检测?CFSE：DOJINDO  488-530
7-AAD：Biolengd  488-675
流式细胞仪：艾森

niwanmao

1、7-AAD染上，说明细胞真死了，因为CFSE浓度过高，是可以发生较大量的细胞死亡。
2、图片上传，如果发帖的时候，工具栏图片按钮可以直接上传，如果回复的话，需要点击右上“高级模式”切换到完整的编辑器窗口才能上传。

hjj

您好，我也有同样的问题，细胞是CD34+细胞。但我的7-AAD和Annexin V 双阳的很少。这是第一天染完CFSE就跑的流式
这已经是补偿以后的图片， 谢谢您@niwanmao

hjj

hjj 发表于 2021-11-28 17:25
您好，我也有同样的问题，细胞是CD34+细胞。但我的7-AAD和Annexin V 双阳的很少。这是第一天染完CFSE就跑的 ...

忘记上传一个图了

niwanmao

hjj 发表于 2021-11-28 17:33
忘记上传一个图了

7-AAD和CFSE存在难调的补偿，所以可以在此图上选择左上角那群真正7-AAD阳性的细胞，再去圈Annexin V阳性的。
总体看起来，双阳的应该是很少的。

hjj

谢谢老师的解答， 已按照您的建议看了。但这样表明我无法用这个共染的方案？您觉得AnnexinV-FITC, PI, ef760,这个方案如何， 非常感谢老师。

niwanmao

hjj 发表于 2021-11-29 15:10
谢谢老师的解答， 已按照您的建议看了。但这样表明我无法用这个共染的方案？您觉得AnnexinV-FITC, PI, ef76 ...

主要是CFSE和7-AAD的补偿难以谈到横平竖直的状态。也不叫不能用。
你不是要用CFSE吗？改成AnnexinV-FITC, PI, ef760，准备用哪个监测增殖？

hjj

niwanmao 发表于 2021-11-29 21:40
主要是CFSE和7-AAD的补偿难以谈到横平竖直的状态。也不叫不能用。
你不是要用CFSE吗？改成AnnexinV-FITC,  ...

谢谢老师的回复。
另一个方案就不用CFSE，用EF670看增殖

niwanmao

hjj 发表于 2021-12-2 16:56
谢谢老师的回复。
另一个方案就不用CFSE，用EF670看增殖

明白了，是 Cell Proliferation Dye eFluor™ 670，只要补偿好调就OK

hjj

谢谢老师