BMDC的流式结果分析

美丽的日子

坛子里各位大神，小弟最近采取CSF+IL-4培养小鼠骨髓来源的DC细胞。从形态上，比较明确是DC细胞。但是测流式的时候，确只测出了MHC2（I-A/I-E）阳性,CD11C一个阳性细胞几乎没有。连续做了2次都是这样。还请各位大神帮忙分析一下原因啊！流式染色步骤如下

1. 准备单细胞悬

2. 用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×10E7细胞/ml。

3. 各取50ul（10E6细胞）细胞悬液到2个圆底的EP管中。

4. 根据抗体说明书在其中1个EP管中加入合适的抗体量，另外1个加入同型对照抗体，冰上避光孵育20分钟（建议每5分钟轻轻混匀，以免细胞沉积）。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。

5. 用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体，300×g离心5分钟，每次离心后小心吸取上清。

6. 用适量染色缓冲液（如500ul）重悬细胞。

7. 流式细胞仪分析染色结果（不超过4小时）。如果暂时无法检测，也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后，避光储存在4度。固定后的细胞可以保存最多一个星期。

流式结果见附件。
请各位有经验的大神看一下，为啥流式做出来是这个奇怪的结果，到底是哪里的问题
还请各位大神们点拨一下！
先谢过各位了！

niwanmao

电压是否合适？是否有可能CD11c电压过低，造成假阴性？