小鼠脾脏Tregs检测

Veblen

请问有经验的做过Tregs的老师：
我的样本小鼠脾脏细胞
做CD45 CD4 CD25 FoxP3染色,数据分析时，实验组与对照组都是全染，补偿也调好的情况下，出现了一个十分奇怪的现象：
其他抗原的荧光强度对照组和实验组没有差异，但是在CD4下面的 (CD25-PE-FoxP3-BV421)双参数图中实验组不管阴性群还是阳性群，整体应该向上及右移动，Why？
一直想不通，请问老师可能的原因是什么，我制备样本及上机操作和分析，我认为均没有问题，都是一起操作的。
如附件图
请大家帮忙看看，谢谢

niwanmao

建议换到BD的机器上再对比一下。

Veblen

niwanmao 发表于 2019-10-18 08:03
建议换到BD的机器上再对比一下。

看了，分析出来都差不多，这可能是什么原因呢

niwanmao

Veblen 发表于 2019-10-18 11:13
看了，分析出来都差不多，这可能是什么原因呢

应该是破膜剂的问题。

Veblen

niwanmao 发表于 2019-10-18 12:41
应该是破膜剂的问题。

谢谢倪老师，我不是特别清楚可能为啥，因为两个样本一起操作的，也都是破膜，染色也一模一样。

niwanmao

Veblen 发表于 2019-10-19 10:33
谢谢倪老师，我不是特别清楚可能为啥，因为两个样本一起操作的，也都是破膜，染色也一模一样。 ...

不是说你操作不好，而是破膜剂效果不好。

Veblen

niwanmao 发表于 2019-10-19 15:36
不是说你操作不好，而是破膜剂效果不好。

老师，有个地方可能是我表达得不够精确，我的实验组都是破膜染了CD25和Foxp3的，另外，对照组是未破膜，染色除CD25和Foxp3以外的所有marker；
想问一下，实验组相对于对照组在CD25-Foxp3的双参数图种，整体往右上方向偏移，我个人认为是破膜剂的问题，但具体原因可能是什么呢？

niwanmao

Veblen 发表于 2019-10-20 16:11
老师，有个地方可能是我表达得不够精确，我的实验组都是破膜染了CD25和Foxp3的，另外，对照组是未破膜， ...

我的意思是，你的破膜剂没破进去，所以只能造成一些非特异性的偏移，而无特异性荧光信号出来。

Veblen

niwanmao 发表于 2019-10-20 20:53
我的意思是，你的破膜剂没破进去，所以只能造成一些非特异性的偏移，而无特异性荧光信号出来。 ...

got it， thank Mr. Ni.