流式可以测的最常见转录因子列表及其所表达的细胞

niwanmao

细胞功能和分化都受调节基因表达的细胞内转录因子的控制，转录因子通常是都蛋白质，因此可以使用特异性抗体进行检测。所以说，转录因子的检测本质上是与检测细胞表面的蛋白质没有什么不同。然而，不同的是，由于目的蛋白位于胞浆中、细胞器中或细胞核中，因此细胞必须破膜，才能使抗体到达结合位点。

通过流式细胞仪检测转录因子需要事先仔细计划，并注意几个问题，例如：“是否需要表面染色来确定目标细胞？”

这个问题的答案至关重要，因为它将决定制备细胞的最佳方法，也将影响所用荧光染料的选择，因为不同的固定方法可能会对荧光分子产生巨大影响。

两种最常见的固定剂是醇和醛，每种都有其优缺点。

醇类（例如乙醇、甲醇或丙酮）是一种脱水固定剂，既可以凝结蛋白质（固定），又可以在脂质膜上形成孔（通透性）。醇类固定后很容易检测到许多细胞周期蛋白和磷酸化特异性蛋白。不幸的是，醇类固定会对诸如GFP的荧光蛋白产生不利影响，使GFP荧光蛋白发生构象改变，从而不再发出荧光，甚至可能从细胞中漏出。

醇类固定也会影响一些常用的荧光染料，包括PE、PerCP和APC，所以这些荧光染料不能作为检测转录因子时表面染色选择。而诸如FITC、AlexaFluor和花青素染料之类的小环氟化合物对醇固定的抵抗力更高。

醛类的话，通常用1-4％的甲醛进行醛固定。醛类是交联固定剂，通过在赖氨酸残基之间形成交联键，从而形成亚甲基桥，从而将蛋白质结构锁定在适当的位置。这通常意味着抗体仍会识别其表位。但是，甲醛本身并不是一种很好的破膜剂，通常需与去污剂结合使用，这是市场上许多破膜剂试剂盒的基础。常用的去污剂包括Triton X-100、溶血卵磷脂、Nonidet-P40和皂苷等。选择哪种去污剂，可能取决于蛋白质的定位，如转录因子位于核内的，通常需使用更强的去污剂如Triton X-100（通常约为0.1％），因为它可以破胞膜和核膜。另一方面，由于皂苷的“温和”和可逆性，无法破入核膜，所以经常只用在细胞因子染色中。



下表概括了流式细胞术可以检测的常见转录因子种类、表达的细胞、胞内的定位，凡是表中的转录因子，大家都可以考虑放弃Western，改做流式，结合一些表面标记，实现更精细的结果，了解在不同亚群中的改变。


数据来源：Eur. J. Immunol. 2017. 47: 1584–1797

niwanmao

苏沁沁 发表于 2019-11-13 09:09
倪老师、在高尔基体表达的转录因子在标记时是否需要阻断？

还是阻断一下吧。

苏沁沁

倪老师、在高尔基体表达的转录因子在标记时是否需要阻断？