求助 裂解出现絮状沉淀、细胞不见分群的原因

zxzy

想请问下有没有血样裂解中出现絮状沉淀的朋友呀...

我是用的商品裂解液，第一次按血样3倍量加裂解液15min后离心，加2%FBS洗一次离心，再加2倍裂解液直接离心。最近三次做都是在第二次离心重悬的时候发现有不溶性的絮状沉淀，然后染色完了上样就发现细胞基本都成一团了，看不出分群。
然后就做了一次只裂解不染色的，结果又分群正常了。但是之前那三次不正常也不是新换的抗体，会是什么原因造成的絮状沉淀和分群异常呢...
问了学校做流式的老师，说是可以第二次离心之后加EDTA，但也没细说剂量什么的，这个靠谱嘛？我没查到文献欸...

niwanmao

先染色，后裂解。并且尽量只裂解一次，用10倍体积。

zxzy

niwanmao 发表于 2019-10-23 09:15
先染色，后裂解。并且尽量只裂解一次，用10倍体积。

我们前期查的文献里也确实都是写的先染色。但是实验室做过的师兄师姐都是先裂解后染色的，我们两种顺序也都试过，但好像先染色的结果不是很好。想请问您，为什么需要先染色在裂解呢？而且您在其他帖子里也说过裂解两次甚至三次都是可以的，为什么说我们应该只裂解一次用10倍量呢？

niwanmao

zxzy 发表于 2019-10-23 11:12
我们前期查的文献里也确实都是写的先染色。但是实验室做过的师兄师姐都是先裂解后染色的，我们两种顺序也 ...

先裂解，目前市场上大多数裂解液对细胞整体有损伤，故建议先染色后裂解，可以一定程度上使得结果更好。