如何提高肿瘤组织单细胞制备过程中的活细胞率

某某人

如题皮下成瘤的B16黑色素瘤，体积均小于100mm^3，理论上内部不会有大量细胞坏死。但是无论使用四型胶原酶消化还是直接研磨，最后zombie aqua染色，上机活细胞率都不超过30%。查阅文献也没有合适的解决方法，请问如何提升细胞活率呢？

niwanmao

消化时间上，目前的多长时间？

irislhy

我觉得消化时间可以作个不同的，看看细胞成活率有没有改变。我觉得消化时间很重要，稍微长一点时间会死得比较多，尤其是药物处理过后再加染色等处理会让细胞比较脆弱。

irislhy

当然还可以考虑染色剂的浓度和时间

杂草兰

消化酶处理好的细胞会有结团，吹不散现象，好多资料说加入DNA酶会好一点，那些会是死细胞吗

niwanmao

杂草兰 发表于 2019-11-18 17:08
消化酶处理好的细胞会有结团，吹不散现象，好多资料说加入DNA酶会好一点，那些会是死细胞吗 ...

由于细胞死亡后释放DNA有粘性容易导致细胞粘连，所以用DNA酶消化有一定效果。

杂草兰

niwanmao 发表于 2019-11-18 19:26
由于细胞死亡后释放DNA有粘性容易导致细胞粘连，所以用DNA酶消化有一定效果。 ...

哦哦，老师，那如果是死细胞，可以直接默认剔除吗

niwanmao

杂草兰 发表于 2019-11-22 16:27
哦哦，老师，那如果是死细胞，可以直接默认剔除吗

像这种释放了DNA的细胞，已经成碎片了，获取的时候大多数是可以通过阈值排除掉的。
但是无论如何，这个样子已经说明了样本状态不太好，一般如果可以重新取材的，尽量重新取材。

某某人

niwanmao 发表于 2019-10-25 07:42
消化时间上，目前的多长时间？

不好意思老师，最近忙没上来看。现在的体系是0.5mg/ml终浓度胶原酶D+DNase，消化30min，上机细胞活率最多只有30%

niwanmao

某某人 发表于 2019-11-27 17:59
不好意思老师，最近忙没上来看。现在的体系是0.5mg/ml终浓度胶原酶D+DNase，消化30min，上机细胞活率最多 ...

你根据http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5834-1-1.html 里面的组织类型，优化一下消化酶，然后做个时间梯度看看哪个时间最合适。