为什么出现对角线无法去除

我是小强

如题，请问各位老师对于这种对角线的干扰有什么合理的解释呢？一般都没有出现这么明显的问题，样本为NK细胞，使用喜树碱处理，浓度逐渐增大，谢谢。

hwthwt

niwanmao 发表于 2019-10-28 13:40
首先调节正确补偿，在补偿调节到位的情况下，对角线信号才考虑为不好。
你这个图上，我看不出补偿有没有 ...

倪老师，我个人的一点经验。他这个图我认为补偿调的差不多了。造成这样的原因可能是他的药可以发荧光。我们实验室有个课题组他们的药在高浓度的时候用FITC/PI做凋亡的图比这个还严重，整个全是45度角上去。完全分不开。后来降低药物浓度和换APC/7-AAD就可以了

niwanmao

调节一下FITC-PI的补偿

haoxu

niwanmao 发表于 2019-10-27 19:50
调节一下FITC-PI的补偿

倪老师，凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗，调节荧光补偿有用吗？

niwanmao

haoxu 发表于 2019-10-28 09:31
倪老师，凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗，调节荧光补偿有用吗？ ...

首先调节正确补偿，在补偿调节到位的情况下，对角线信号才考虑为不好。
你这个图上，我看不出补偿有没有调到位，感觉应该是没调。

特勒兮兮

haoxu 发表于 2019-10-28 09:31
倪老师，凋亡流式实验中对角线的不是表示死细胞吗，调节荧光补偿有用吗？ ...

这个明显补偿没调好

niwanmao

hwthwt 发表于 2019-10-30 07:42
倪老师，我个人的一点经验。他这个图我认为补偿调的差不多了。造成这样的原因可能是他的药可以发荧光。我 ...

如果只看第一管，像。
但是结合后面几管，就不像。
楼主一直没反馈其FITC－PI的补偿是多少，所以无法确定，但我更倾向于是补偿。

tiger

niwanmao 发表于 2019-10-30 07:51
如果只看第一管，像。
但是结合后面几管，就不像。
楼主一直没反馈其FITC－PI的补偿是多少，所以无法确定 ...

喜树碱淡黄色，确实有荧光，高浓度下影响PI和FITC，6楼说的有道理。我们做的许多植物提取物都存在这种现象。可通过加大PI浓度、增加补偿或调换荧光标记物来解决。

我是小强

非常感谢倪老师的回复以及各位大神的回复，我的初始荧光补偿是FITC-PI=7%，但是几乎没有变化，增加到180%才会成竖直状，所以基本上是自发荧光或者是药物的荧光问题，再次感谢各位。