CD14+单核细胞分选

qiulinluo

各位老师，我们最近使用美天旎的磁珠分选，从PBMC中分选CD14+单核细胞，前几轮分选，最后得到的CD14+纯度≥85%，（单核细胞/（除死细胞以外的total）），但是近两轮分选结果显示，纯度＜50%，分选得到的CD14+单核细上机检测，发现FSC-SSC图显示淋巴细胞比例比淋巴细胞还高，分选的上清（CD14-）显示单核细胞基本被去除。同一实验人员，操作一致，不知道问题出在哪里。  抽提的PBMC中如果红细胞残留过多，是否会影响分选？  按说明书上柱子前以500ulbuffer重悬＜10的8次方细胞，如果细胞量在8x10的7次方左右，buffer的量增加是否更合适？  哪位老师可以帮忙解答一下，分享一下经验吗？

qscdawx

没有很看懂你的描述。不过可能有几个可能，
你有对细胞计数吗？每个柱子有吸附能力的限制，数量太多就吸不住了留下来，导致你细胞纯度下降。
buffer的话没有太大的关系，你可以看自己心情适当增加，但是也别加太多， 他们的柱子洗多了就感觉有点堵 流不太下来

qiulinluo

qscdawx 发表于 2019-11-11 11:14
没有很看懂你的描述。不过可能有几个可能，
你有对细胞计数吗？每个柱子有吸附能力的限制，数量太多就吸不 ...

计数了，大概是8×10的7次方，以500ul重悬，过柱

qiulinluo

qscdawx 发表于 2019-11-11 11:14
没有很看懂你的描述。不过可能有几个可能，
你有对细胞计数吗？每个柱子有吸附能力的限制，数量太多就吸不 ...

如果抽提的PBMC中，红细胞残留过多，会不会很影响过柱

qscdawx

请问是过的LS的柱子吗，LS好像是最多吸附10^8的细胞？MS的只能吸附10^7。

红细胞过多还是会有一定程度上影响，造成堵塞柱子和非特异性结合之类的， 最好还是裂红稍微干净一些。

qiulinluo

qscdawx 发表于 2019-11-11 16:48
请问是过的LS的柱子吗，LS好像是最多吸附10^8的细胞？MS的只能吸附10^7。

红细胞过多还是会有一定程度上影 ...

LS的柱子