CD34造血干计数

guo919370840

近期利用ISHAGE方案流式做了十几份脐带血造血干CD34计数，测出的结果在0.2%-0.6之间，老师说结果偏低，我想请教大神，脐带血CD34计数一般在什么数值范围呢？有没有相关的文献呢？谢谢啦

niwanmao

也不一定，关键还需要从你的样本处理、设门细节上看。

参考一下这篇《Enumeration of CD34+ cells in cord blood: A variation on a single‐platform flow cytometric method based on the ISHAGE gating strategy》

guo919370840

niwanmao 发表于 2019-11-12 23:11
也不一定，关键还需要从你的样本处理、设门细节上看。

参考一下这篇《Enumeration of CD34+ cells in cord ...

谢谢  老师

wmj123456

niwanmao 发表于 2019-11-12 23:11
也不一定，关键还需要从你的样本处理、设门细节上看。

参考一下这篇《Enumeration of CD34+ cells in cord ...

倪老师，关于CD34造血干计数，我有几个疑问啊，想请教您，
1我看有些方案是直接根据CD45和SSC圈出CD45弱阳和阳的白细胞，然后出来后根据CD34和SSC圈出CD34+的细胞，就可以得出CD34+细胞数了，这个设门方式和ISAGE的设门方案比较，具体区别在哪？
2关于单平台的ISAGE设门，我的方案是CD45，CD34，7AAD，根据ISAGE方案圈门了，如下所示，想问问第二行的4张图，要看CD34+里面的FSC和SSC，CD45和SSC，淋巴细胞里面的FSC和SSC，不太理解意义何在？
3目前单平台体积法是不是也比较方便，可信度也比较高了吧

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-6-2 19:07
倪老师，关于CD34造血干计数，我有几个疑问啊，想请教您，
1我看有些方案是直接根据CD45和SSC圈出CD45弱 ...

你这个方案是完善的，但是抗体染色和设门的问题还是存在的：
1、CD34分得不开，导致一些弱表达的假阳性信号也被包括在内，建议检查一下CD34的克隆号，如果属于I类抗体，需要避免使用。
2、7-AAD，平时死细胞是否在弱阳区域？如是，目前的门是过大的。
3、G2门切掉一些弱表达的，是否会切掉一些干细胞，需要仔细确认
4、 G5的CD45/SSC原始区域似乎存在较多边缘信号，这往往认为是一种非特异信号？还是被切的干细胞？需仔细确认其在7-AAD上的分布
5、各通道的补偿，注意

wmj123456

niwanmao 发表于 2024-6-2 20:19
你这个方案是完善的，但是抗体染色和设门的问题还是存在的：
1、CD34分得不开，导致一些弱表达的假阳性信 ...

倪老师，明白您的意思了，7aad我把阴性的门变小了，另外G2的门变大了，之前的圈法是把一些干细胞漏掉了，请问干细胞为何在碎片的位置？
这是重新圈门的图，麻烦您再看看有无改善的地方

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-6-3 14:46
倪老师，明白您的意思了，7aad我把阴性的门变小了，另外G2的门变大了，之前的圈法是把一些干细胞漏掉了， ...

1、抗体克隆号确认
2、这个分群不像真实，建议分别找一个含量高的和一个全血，作为高值和低值样本进行验证