有关标记Treg的FOXP3破膜是否过夜的问题

ghost2r

我们实验室有的老师说标记好CD4\CD25以PBS洗涤后，加破膜液4度过夜，第二天再加FOXP3抗体孵育？这样行吗？还是破膜30分钟就标记FOXP3？

另外，我看到有的文献上说要加入稀释好的2%（2ul）的正常大鼠血清，可以省略这一步骤吗？

谢谢大家！

niwanmao

一般标本的抗原随着时间的延长，多少会出现丢失现象，我估计你们老师可能是为了方便起见而建议你们这么做，但如果从标准操作来说，非常不建议这么做。而且，破膜剂作用这么长时间，也会对细胞表面的标记会有影响。

加入2％的大鼠血清，应该是起到封闭非特异性位点的作用。

aninawang

Foxp3染色时有一特殊的固定穿膜液（BD），可以允许4度穿膜过夜。

wzr19990923

我们做了很长时间的Foxp3了，我的感觉和第一个回答一样，破膜剂作用时间过长也会对细胞表面的标记会有影响，甚至细胞会破碎，应严格按照说明书的步骤操作。至于2％的大鼠血清加或不加没有差别，理论上说是封闭非特异性位点，实际上没有区别。这是我们的经验，仅供参考。

chujindong

我也准备做Treg了，以后多请教

niwanmao

我也准备做Treg了，以后多请教
chujindong 发表于 2011-3-16 20:55

                               
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你们准备用CD127还是FOXP3？

chujindong

回复 niwanmao 的帖子
用FOXP3，订的是BD的kit

   

sugarswallow

估计如果是FOXP3，还是EBIOSCIENCE公司的用得多些，这个时候可以参照sakaguchi(发现Treg细胞的日本人）组发的文章，FOXP3通常用的是EBIOSCIENCE的，
另外，如果能检测FOXP3是精标准，CD127和CD25是间接的，是分选的时候没法用FOXP3标志的时候才用。当然，现在基本上CD4CD25FOXP3三标记就可以界定TREG

qiqicheng

想请教一下各位，做Treg需不需要刺激呀，我们做的是不刺激的，结果做出来基本就是阴性结果，跟不刺激是不是有关系呀？

yanchong

不需要刺激，建议使用ebioscience的kit，还有eb固定破膜剂的效果也是很好的。