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[流式protocol] OMIP-061:单管20色分析小鼠抗原递呈细胞

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发表于 2019-12-1 15:51:05 | 显示全部楼层 |阅读模式

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抗原呈递细胞(APC)是适应性免疫的关键协调者,更深入理解APC异质性和功能专一性的分子和细胞机制,对于开发各种预防和治疗微生物病原体和癌症的治疗策略至关重要。 现在人们认识到,不同的抗原和生物学环境可能会对载有抗原的细胞及其在建立和维持免疫记忆中的作用产生重大影响。 然而,由于技术的局限性、表型特征的时空异质性以及与APC细胞种类命名共识欠缺,很难在免疫应答启动过程中对关键细胞参与者进行全面检查。

Anthony T. DiPiazza等人在《OMIP‐061: 20‐Color Flow Cytometry Panel for High‐Dimensional Characterization of Murine Antigen‐Presenting Cells》中给我们带来一管20色方案,通过该方案和设门策略,有助于深入了解小鼠外周血和淋巴组织的细胞组成,包括NKT和T细胞、B细胞、中性白细胞、包膜下窦巨噬细胞(subcapsular sinus macrophages,SSM)、边缘窦巨噬细胞(marginal sinus macrophages,MSM)、单核细胞和髓索巨噬细胞(medullary cord macrophages,MCM)、cDC1、cDC2、浆样DC(pDC)和单核细胞衍生的DC(moDC)(也称为炎性DC)。

方案
下表列出了20色方案中所用的抗体,及其荧光素、克隆以及作用
20191201_111821.png

设门步骤
鼻内呼吸道合胞病毒(RSV)感染后,取小鼠肺引流纵隔淋巴结样本机械处理后进行检测。下图显示了整体的设门策略:
20191201_120233.png

更详细的设门,请参见下面三幅图,我们将其中的设门关系通过箭头和文字进行了标注:
20191201_131709.png 20191201_132029.png 20191201_132427.png


文献源:DiPiazza AT, Hill JP, Graham BS, Ruckwardt TJ. OMIP-061: 20-Color Flow Cytometry Panel for High-Dimensional Characterization of Murine Antigen-Presenting Cells [published online ahead of print, 2019 Aug 19]. Cytometry A. 2019;10.1002/cyto.a.23880. doi:10.1002/cyto.a.23880

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