结果分析中，是阳性比例重要还是MFI重要？

zhkduck

机器：BD，C6
细胞：PBMC分离T细胞
实验目的：已知某阳性抗体和T细胞中某些亚群有结合，比较待测样品与阳性抗体的结合强弱。
结果如图所示，以空白组设限分为V2-L（阴性）及V2-R（阳性）
是应该比较总细胞的MFI
还是比较V2-R（阳性）的细胞比例
还是比较V2-R（阳性）的细胞的MFI？
请各位老师解惑

niwanmao

这个是分群还算可以的，建议比例优先。

zhkduck

阳性对照组里，V2-R的细胞比例虽然少，但是MFI更高，意思是结合更强吗？

niwanmao

zhkduck 发表于 2019-12-6 16:50
阳性对照组里，V2-R的细胞比例虽然少，但是MFI更高，意思是结合更强吗？

MFI反映的是平均荧光强度，和细胞表面结合的分子数量有关，所以MFI更高可以解读为结合的数量略多。但是我觉得你已经明显的分群了，还要拿MFI说话吗

zhkduck

niwanmao 发表于 2019-12-9 08:49
MFI反映的是平均荧光强度，和细胞表面结合的分子数量有关，所以MFI更高可以解读为结合的数量略多。但是我 ...

谢谢倪老师，那么是不是说在分群不明显的时候，还是需要看MFI而不是阳性比例？

niwanmao

zhkduck 发表于 2019-12-9 09:02
谢谢倪老师，那么是不是说在分群不明显的时候，还是需要看MFI而不是阳性比例？ ...

我个人的意见是这样。

leiming319

V2-L 反映背景荧光水平和抗体非特异性结合能力，MFI数值低说明非特性荧光结合能力更弱；另一方面，V2-R荧光强度更强，说明抗体特异性结合能力更强。从你的结果来看，negative control更胜一筹。需要量化的话，建议计算stain index，然后比较stain Index的大小。