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[磁珠分选] 小鼠肺组织内皮细胞分选

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发表于 2019-12-5 14:47:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
我有个问题想请教大家,我想分离小鼠肺组织的内皮细胞,我用的是Biotin-CD31,先和小鼠肺组织细胞共同孵育,然后加入磁珠,最后用磁极吸附。在标完FITC-CD31抗体后检测分离效率,发现只能达到百分之50左右,请问有可能是哪里有问题呢?我看到文献里是这样做的,先用带荧光的CD31敷育细胞,然后加入IgG磁珠,然后流式检 QD57NGWNAD@}`N{G0$]28RN.png 测这个荧光,效率能达到百分之九十多,我觉得这样做不太对啊。


发表于 2019-12-5 21:37:20 | 显示全部楼层
用带荧光素的抗体孵育然后再磁珠分,确实是第一次看到。但如果荧光素不影响磁珠与其结合,是可以的。
发表于 2019-12-6 14:55:03 | 显示全部楼层
文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒,你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒,所以他不用分选后再标记荧光素。你这种要再标记荧光素一次,麻烦一些,变数也多一些,你也可以换这种直接抓取FITC的磁珠分选试剂盒。 对于磁珠的正选来说,想增加纯度,需要增加过磁场的次数,但回收率会相应降低,属于正常现象

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 楼主| 发表于 2019-12-8 18:30:01 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-12-5 21:37
用带荧光素的抗体孵育然后再磁珠分,确实是第一次看到。但如果荧光素不影响磁珠与其结合,是可以的。 ...

好的,谢谢老师。
 楼主| 发表于 2019-12-8 18:34:32 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2019-12-6 14:55
文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒,你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒,所以他 ...

好的,谢谢老师,可是如果后期我不需要每次都检测纯度了,就不需要带荧光标记的CD31了,要怎么做呢?
 楼主| 发表于 2019-12-8 18:35:22 | 显示全部楼层
谢谢老师们的回复,可是如果后期我不需要每次都检测纯度了,就不需要带荧光标记的CD31了,要怎么做呢?
 楼主| 发表于 2019-12-8 18:35:42 | 显示全部楼层
liuruiluna 发表于 2019-12-6 14:55
文献用的是抓取FITC荧光素标记抗体的磁珠分选试剂盒,你用的是抓取biotin标记抗体的磁珠分选试剂盒,所以他 ...

好的,谢谢老师,可是如果后期我不需要每次都检测纯度了,就不需要带荧光标记的CD31了,要怎么做呢?
发表于 2019-12-9 09:45:53 | 显示全部楼层
那就不管它呀,分选完了想做什么做什么(如果你做的不是与荧光检测相关的实验),不上机检测纯度就行了
发表于 2020-1-10 19:24:21 | 显示全部楼层
lilychen723 发表于 2019-12-8 18:34
好的,谢谢老师,可是如果后期我不需要每次都检测纯度了,就不需要带荧光标记的CD31了,要怎么做呢? ...

一般后续培养几天,抗体应该就会掉下来了。
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