小鼠外周血分析NK细胞

Claire

最近用流式分析小鼠外周血血中NK细胞含量，不知道为什么淋巴细胞特别少而碎片特别多，做了几次都是这样，有人能帮忙解答吗？我的操作是这样：100uL全血，染抗体30min，加2mL 氯化铵裂解液室温15min, 1500rpm离心5min，2mL 1%FBS的PBS 500g,5min洗一次后，300uL重悬上机，

liuruiluna

感觉是一气裂解15分钟时间过长。裂解时间缩短到10分钟，加入PBS终止裂解，离心。试试。如果离心后看到残留红细胞多，再加1ml裂解液，裂解个两三分钟，加PBS终止裂解，离心。

niwanmao

裂解没问题，细胞都挺好，主要是碎片区信号太多了。把FSC获取的阈值设置到100万左右位置，就能使你的白细胞获取数量大增，淋巴细胞和单核区域的比例就会很高了。

Claire

niwanmao 发表于 2019-12-30 10:52
裂解没问题，细胞都挺好，主要是碎片区信号太多了。把FSC获取的阈值设置到100万左右位置，就能使你的白细胞 ...

好的，谢谢倪老师，下次我试试看

流123456

请问老师 您的裂红液是自己配置的 还是买的商品化的裂红液啊

niwanmao

流123456 发表于 2023-1-17 10:02
请问老师 您的裂红液是自己配置的 还是买的商品化的裂红液啊

一般问题不大的，自己配制也简单，ACK裂解液比较常用，一般配制1升的ACK裂解液，只需三个试剂：

成份	用量	终浓度
氯化铵 (mw: 53.49 g/mol)	8.02 g	0.15 M
碳酸氢钾 (mw: 100.12 g/mol)	1 g	0.01 M
EDTA二钠(mw: 372.24 g/mol)	0.0372 g	0.0001 M

加水至1升。配制出的ACK裂解液可直接用，室温可保存6个月。