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细胞内钙离子检测经验分享

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发表于 2019-12-30 10:00:20 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本实验室的学生之前做了几次钙离子检测均未做出结果,此次终于用BD LSRFortessa流式仪检测出钙离子动态变化趋势。弄懂了横坐标Time的数字,表示的是多长时间。。
上机方案过程建立如下:先用检测样本管上机,AquireData20s,然后暂停获取样本,快速将刺激剂加入样本管中,混匀后将该管上机(该过程越快越好,因为钙离子变化很快),Append继续收集5分钟(300s)。起初用该方法检测一直没有趋势,怀疑过是不是机器没有调试好检测不出来,这次换了一种刺激剂终于做出来了。说明方案没问题,是之前刺激不够。

葡萄糖刺激,未有变化

葡萄糖刺激,未有变化

氯化钾刺激,有趋势

氯化钾刺激,有趋势

根据设定的时间,未刺激20s和刺激后上机300s共计320s。如图,横坐标32,000的位置相当于320s。之前因为没有变化趋势,且因为是叠加收集没有分割线,无法弄清楚收样20s对应的横坐标位置。此次有明显的趋势变化,20s对应横坐标2*1,000的位置,即表示每个间隔表示0.01s。

根据本次结果,刺激后变化不明显,下次可改进一下收集时间。未刺激样本收集时间可适当延长,缩短刺激后收集时间。
欢迎大家补充讨论~

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niwanmao + 8 绝对珍贵的实战经验,赞一个!加分鼓励.

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流式中文网FlowGuard®流式专用保存液,无需冻存,稳定保护各类流式样本,从容完成实验
发表于 2019-12-30 19:02:54 | 显示全部楼层
除了您提到的KCL, ionomycin刺激引起钙硫的效果也不错。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2019-12-31 12:06:02 | 显示全部楼层
非常感谢倪老师对我们的支持!
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 楼主| 发表于 2019-12-31 12:07:20 | 显示全部楼层
Veblen 发表于 2019-12-30 19:02
除了您提到的KCL, ionomycin刺激引起钙硫的效果也不错。

感谢站友的分享
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2019-12-31 12:21:08 | 显示全部楼层
感谢楼主无私的分享
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发表于 2020-1-4 21:05:29 | 显示全部楼层
曾经用流式做钙流,奋斗了好久没有预期的结果。最后直接细胞培养孔板里面,在孔板里面染色,用荧光显微镜进行观测的。效果不错,最后文章也接收了。
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-1-5 10:15:57 | 显示全部楼层
a86856635 发表于 2020-1-4 21:05
曾经用流式做钙流,奋斗了好久没有预期的结果。最后直接细胞培养孔板里面,在孔板里面染色,用荧光显微镜进 ...

荧光显微镜肉眼能看出差异,流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题?
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2020-1-5 17:48:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-5 10:15
荧光显微镜肉眼能看出差异,流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题? ...

仪器上样时的振动刺激,温度变化的刺激,从上样到检测到信号的延迟等。总是不如人意。有些仪器可能确实不适合做钙流检测吧。
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发表于 2021-12-9 08:58:50 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-5 10:15
荧光显微镜肉眼能看出差异,流式更加能检测出差异才对啊。是仪器的问题? ...

倪老师,请问一下,做细胞内钙流的检测,BD calibur可以做吗?https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8158-1-1.html
这个帖子里用的是BD LSRFortessa。另外钙流检测可以采用直方图进行收集统计吗?谢谢
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发表于 2021-12-9 14:43:35 | 显示全部楼层
xzmczff 发表于 2021-12-9 08:58
倪老师,请问一下,做细胞内钙流的检测,BD calibur可以做吗?https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8158- ...

Calibur可以做的,同样也是要基于Time参数。
不能用直方图,直方图看不出随时间变化的钙离子染料强度变化。
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