多图，流式检测血小板功能的方案设计、优化和性能

niwanmao

流式细胞术是一种复杂的分析技术，可用于以极高的准确性和精度评估血小板的表型和功能。 随着技术的发展，流式细胞仪已被用于遗传性血小板疾病的临床研究。 全血血小板流式细胞术相对于其他血小板分析技术（例如透光聚集法）具有许多优势，那些技术需要大量的样品并且灵敏度有限，而流式样本用量很少， 这在小儿人群中尤为重要，在小儿人群中，医源性失血的后果非常明显。 此外，与全血的血浆相比，使用全血是有利的，因为样品处理步骤最少，这减少了分析前的变化，并且对于医院实验室进行操作更可行。
除了能测量单个血小板表面标志物的表达外，还可使用流式细胞仪测量血小板表型和功能的许多其他参数，包括促凝血小板的形成、血小板磷酸化、血小板钙流、单核细胞-血小板聚集体的形成等等。 这些测定需要不同的条件，应分别设计和优化。

2020年1月6日，Busuttil-Crellin X等人在Platelets杂志上发表了一篇综述，介绍血小板流式方案的设计、优化、问题排除和验证，这类标准化步骤可应用于任何全血血小板流式细胞方案的设计和优化。

在这里，我们将PDF放在最后供大家学习参考，只从里面摘录七幅图表先大致学习一下。
1、血小板表面常见膜受体及其功能：


2、检测CD41a和GPVI表达时，采用的方案示例（注意，这仅仅是示例，如果你需要检测更多的功能标记，可另外设计），里面包括了未染色管调电压、同型对照管看背景（这里的概念还是用同型设门，仅供参考）、FMO了解荧光渗漏、最后实验管定表达：



3、全血血小板流式的实验流程图：



4、血小板功能评估时，常用的激动剂及其靶标：



5、常用抗凝剂的优劣，可见在血小板功能的流式评估中，最好的还是柠檬酸抗凝剂：



6、流速对血小板流式结果的影响，低速可获得最纯的血小板群体：



7、利用CD42b/SSC圈选血小板的一个示例：



文中还介绍了其它一些需注意的小细节，在此不多说，请见附件：
guidelines for panel design, optimization, and performance of whole blood multi-.pdf (1.17 MB, 下载次数: 43, 售价: 1 流星)

2020-1-13 19:04 上传

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参考文献：Busuttil-Crellin X, McCafferty C, Van Den Helm S, et al. Method article: guidelines for panel design, optimization, and performance of whole blood multi-color flow cytometry of platelet surface markers [published online ahead of print, 2020 Jan 6]. Platelets. 2020;1–8. doi:10.1080/09537104.2019.1709630

facetodog

往类实验的确也该跟上时代了

骑猪上高速

倪老师，附件的pdf里面有一段话如图所示，他所说的产生虚假结果的原理我不是很懂，为什么laser area scaling and window extension are often calibrated for particles in the ~10um range。

niwanmao

骑猪上高速 发表于 2020-2-15 00:33
倪老师，附件的pdf里面有一段话如图所示，他所说的产生虚假结果的原理我不是很懂，为什么laser area scalin ...

意思是，对于大的细胞（10um左右的），FSC-A/FSC-H，可作为排除粘连体依据，但对于血小板这么小的不能用。