查看: 63|回复: 8
收起左侧

[功能检测] 小鼠肿瘤模型回输T细胞血液检测不到T细胞

[复制链接]
发表于 2020-2-10 14:54:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
CAR-T回输,小鼠生存率延长,但是从始至终在小鼠外周血中都检测不到人源CD3的表达,也试过不同克隆号,出现这个现象的可能有什么?

发表于 2020-2-10 19:01:08 | 显示全部楼层
你们的CAR-T在制备出来之后,有没有检测过CD3?
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-2-10 19:01
你们的CAR-T在制备出来之后,有没有检测过CD3?

测过,90%以上,car的转导效率也很高
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
wanng 发表于 2020-2-11 09:50
测过,90%以上,car的转导效率也很高

那么你回输之后的检测,样本处理步骤是如何的?
 楼主| 发表于 7 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-2-11 11:28
那么你回输之后的检测,样本处理步骤是如何的?

血液瘤模型,回输CAR-T后,第七天每隔一周检测外周血,先是裂红,国产的裂红液,室温五分钟,300g*5分钟,两次,最后只剩下白细胞团块。用10%血清4度封闭半个小时,加入CD3抗体1:50或者1:25,用过OKT3,UCHI, HIT3克隆号。不固定直接上机检测
发表于 7 天前 | 显示全部楼层
wanng 发表于 2020-2-11 13:13
血液瘤模型,回输CAR-T后,第七天每隔一周检测外周血,先是裂红,国产的裂红液,室温五分钟,300g*5分钟 ...

其它抗体都没?
这里就有个问题,因为虽然你回输的细胞量可能会比较多,但是到了小鼠体内,一个会稀释,另一个可能会分散到组织中,所以你最后采到的小鼠血里面,含量肯定不会多,我的建议是最好加一个小鼠的白细胞共同抗体(例如抗小鼠CD45),将小鼠的细胞排除掉之后,再分析,这样会更好。而且要切记,细胞量一定要取得足够多。
 楼主| 发表于 6 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-2-11 19:48
其它抗体都没?
这里就有个问题,因为虽然你回输的细胞量可能会比较多,但是到了小鼠体内,一个会稀释, ...

后期我们CD3不能成功染色,我们加了人源CD45去确定T细胞,并没试过鼠源的CD45,能看到一点分群,但后期证实这一群CD45阳性细胞是建立小鼠模型用的人源细胞系所表达的,并不是T细胞表达。

虽然说打进去的细胞会在体内稀释,但是毕竟经过一周以上的时间,T细胞也会大量增殖,并且是血液瘤模型,有抗原存在,更会促进CAR-T的增殖。

小鼠外周血我们取了100ul,裂完红很明显的白细胞团块,收集记录了100000个细胞。
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
wanng 发表于 2020-2-12 16:16
后期我们CD3不能成功染色,我们加了人源CD45去确定T细胞,并没试过鼠源的CD45,能看到一点分群,但后期证 ...

很可能是你的CART并没有在小鼠体内大量增殖,而是打进去后仅仅在小鼠体内发挥了共孵育的杀伤作用就死掉了。你可以打进去4h,24h就检测一次,可以检测到。
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
wanng 发表于 2020-2-12 16:16
后期我们CD3不能成功染色,我们加了人源CD45去确定T细胞,并没试过鼠源的CD45,能看到一点分群,但后期证 ...

理论和现实总是有差距的,所以才需要做实验。
可能如@zengyikaren  站友所说的那样,CAR-T并没有发生增殖,因为在临床上CAR-T回输病人体内后,也经常出现这种情况,因为T细胞已经是终末期细胞了,你期待它们发生增殖,可能性太小,除非你输入的T细胞是TSCM阶段的。
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

手机版|流式中文网    

GMT+8, 2020-2-18 02:58

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.