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[结构和原理] 调节补偿时单染管的阳性率在95%以上,阴性细胞群没有

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发表于 5 天前 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
本帖最后由 chaoslure 于 2020-2-14 08:29 编辑

在做干细胞的流式补偿时遇到这样一个问题,由于干细胞经分离培养细胞的纯度很高,在进行流式分析时,我们按照常规流式操作,第一管阴性对照,第二管FITC单标+PE-IG,第三管PE单标+FITC+IG,第四管PE+FITC双标。在第二管和第三管可以看到阳性率很高几乎看不到阴性细胞群。通常在调节补偿时需要一次上样既有阴性细胞群又有阳性细胞群,出现这种情况我们应该如何调节补偿?
图片5.jpg
我想到两个思路希望各位老师指点一下:
方法一:
在实验过程中,既然第二管和第三管没有阴性细胞群,那么我们可以制造阴性细胞群,比如在上样前将第一管的细胞取部分加入到第二管和第三管中。
方法二:
在分析过程中,在分析时第二管和第三管没有阴性细胞群,我们可以将第一管的图做为阴性对照,分别计算三管细胞的EP和FITC的MFI值,手动调整补偿矩阵让第一管的MFI-PE≈第二管的MFI-PE,第一管的MFI-FITC≈第三管的MFI-FITC。
不知哪种方法更好,或者有更好的调节补偿方法?请各位老师指点一下。

发表于 4 天前 | 显示全部楼层
用方法一
 楼主| 发表于 前天 10:00 | 显示全部楼层

倪老师,因为有些实验按照之前的方法已经做完了,无奈之下只能按照方法二分析数据,所以想跟您请教一下,用方法二分析数据会出现那些不足的地方,分析得到的结果是否可信?
发表于 前天 21:01 | 显示全部楼层
chaoslure 发表于 2020-2-16 10:00
倪老师,因为有些实验按照之前的方法已经做完了,无奈之下只能按照方法二分析数据,所以想跟您请教一下, ...

不混在一起,处理过程中的差异、上机时的差异,都会影响两者的相对位置,造成补偿不准。
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