比较不同时间点的MFI科学吗？

浪漫纷飞

请教倪老师及各位大神：看到一些文献，比较不同时间点某一指标的MFI（如图），这种比较方法科学吗？每次上机的电压不一样、补偿不一样，应该会影响吧。

niwanmao

要比较不同时间点的某一指标MFI，是需要一起处理、一起上机才行。如果做不到，也可以采用同一类性质比较稳定的细胞作为参照，做一个比值也可以。

Fzw

看不到图哎，但是前几天听technician提到的一个方法是，其实和倪老师的方法很像：每次流式之前都会用CST beads校准仪器，那么可以在第一次的实验中保存application setting（个人推测此时保存的是自己实验参数与beads参数的相对值），那么在下一次的实验中可以直接应用这个application setting，仪器此时会自动根据新一次的beads参数给你算回到原来的实验参数，那么两次不同时间点的实验就认为实验参数一致，从而MFI具有可比性

hannotech

比较MFI一般不推荐（除非实验条件非常接近），一般实验前用标准球较正，或是计算MESF

samly0

我们这里有学生这样做的：每次上机前通过调电压把对照组检测指标（比如测ROS)的MFI调成跟上次对照一致的MFI，比较不同批次或时间点的，前提当然是在同一仪器上机，我觉得这办法不错啊

智人小赵

niwanmao 发表于 2020-3-1 10:48
要比较不同时间点的某一指标MFI，是需要一起处理、一起上机才行。如果做不到，也可以采用同一类性质比较稳 ...

请教一下倪老师，每个样本都测一个目的蛋白偶联荧光的iso，分析每一个标本的时用目的蛋白荧光指标的MFI/isotye MFI，最后比较样本的该比值，这样可以吗

niwanmao

智人小赵 发表于 2023-9-4 19:02
请教一下倪老师，每个样本都测一个目的蛋白偶联荧光的iso，分析每一个标本的时用目的蛋白荧光指标的MFI/i ...

听上去可行，但实际上过于复杂化。

一般只要仪器状态稳定，最佳的方法是用绝对荧光定量微球做MFI与ABC（绝对分子数量）之间的标准曲线，然后再跑细胞，通过MFI反算ABC。这是最好的方法。

智人小赵

niwanmao 发表于 2023-9-4 21:48
听上去可行，但实际上过于复杂化。

一般只要仪器状态稳定，最佳的方法是用绝对荧光定量微球做MFI与ABC（ ...

学习了，谢谢倪老师！

智人小赵

niwanmao 发表于 2023-9-4 21:48
听上去可行，但实际上过于复杂化。

一般只要仪器状态稳定，最佳的方法是用绝对荧光定量微球做MFI与ABC（ ...

倪老师，不好意思，在请教您一下，因为我们实验室的流式仪不是BD的，是赛默飞的仪器，这款仪器配的微球是AccuCheck™ ERF 参考颗粒，这个是做MFI与ERF值的标曲，这个方法和您说的也是原理相同的吧，谢谢倪老师（附一个该产品的说明书）赛默飞微球说明书

niwanmao

智人小赵 发表于 2023-9-5 14:12
倪老师，不好意思，在请教您一下，因为我们实验室的流式仪不是BD的，是赛默飞的仪器，这款仪器配的微球是 ...

看了下说明书，可以的。