CPHEN-02：人外周血NK细胞分群精细分型

niwanmao

NK细胞是固有淋巴细胞（ILC）家族的具有细胞毒功能的一员， 它们能够通过激活和抑制受体传递的信号之间的微妙平衡，识别并杀死转化细胞，包括肿瘤或病毒感染的细胞，并分泌各种可溶性因子。
NK细胞在40年前被认为大型颗粒状淋巴细胞，能够杀死目标细胞而无需事先致敏，且能避免杀伤健康的自体细胞。仅仅几年后，才发现了HLA I类特异性抑制受体（代表主要的NK细胞免疫检查点）和一系列活化的NK受体（天然细胞毒性受体（NCR：NKp46、NKp30和NKp44）、NKG2D和DNAM-1以及共受体NTB-A、2B4、NKp80和CD59），从而阐明了它们的功能机制。特别是，NK细胞可以通过所谓的抑制性杀伤性Ig样受体（KIR）、白细胞免疫球蛋白样受体、subfamily B member 1 (LILRB1)和/或CD94-NKG2A异二聚体来识别自体正常细胞上的人白细胞抗原（HLA-1）分子，这些相互作用能产生负性调节信号，从而防止杀死自体健康细胞。在下调/失去HLA-1分子的表面表达的靶细胞的情况下，如在肿瘤转化或病毒感染期间发生的那样，HLA-1特异性NK抑制受体不能进一步识别其配体，便能随后通过激活受体活化NK细胞。因此，已经失去I类HLA表达的肿瘤细胞，虽然能避免CD8 T淋巴细胞攻击，但逃不过NK细胞的追杀。
通常，人NK细胞约占外周血（PB）淋巴细胞总数的10％，存在不同的NK亚群，不同的亚群在溶细胞活性、细胞因子产生和归巢能力方面显示出明显的功能差异。
平时，我们大多数人只把NK分为CD56dimCD16+和CD56 brightCD16-两类，但实际上，NK的功能亚群，并不仅仅这两群，目前的文献综合起来，可分为8个功能亚群（实际上其中Terminally Differentiation和Memory-like两个亚群是Mature下细分的两个），这8个亚群的粘附分子、趋化因子和细胞因子受体、死亡受体、活化受体、抑制受体等表达如下表：


这张表，太多的标记了，眼花缭乱，没关系，下面直接来挑几个重要的标记，看看如何设门分析上面8个亚群。下图中的CD56 brightCD16neg/dim就是Immature，Donor1是巨细胞病毒阴性（即作为正常参照），Donor2是CMV病毒阳性的患者，明显可以看出在NK亚群组成上两者之间的不同：


NK 细胞从 CD56bright 到 CD56dim 阶段成熟时是如何发生表型变化呢：
- CD56bright 细胞在失去 NKG2A 的同时获得 CD16 和 KIR
- CD57 和 CD16bright 的表达，标志着NK细胞完全成熟
- 细胞毒分子（如穿孔素）在成熟过程中上调

某些表面受体只存在于某些成熟阶段，使我们能够区分未成熟与成熟的 NK 细胞群。

利用流式细胞术，可以对人外周血中存在的不同 NK 细胞亚群进行细致的分群，发现NK 细胞在其成熟过程中如何发生表型变化，以及像 CMV 这样的某些感染如何能够塑造 NK 细胞库。 NK 细胞表型对于分析健康和疾病中 NK 细胞的研究具有重要意义。

参考文献：Del Zotto G, Antonini F, Pesce S, Moretta F, Moretta L, Marcenaro E. Comprehensive Phenotyping of Human PB NK Cells by Flow Cytometry [published online ahead of print, 2020 Mar 21]. Cytometry A. 2020;10.1002/cyto.a.24001. doi:10.1002/cyto.a.24001


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2023-12-6 16:01 上传

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木棉大叔

分的这么详细，不知道有没有做过骨髓细胞内的NK分类

laogong

倪老师，请问一下，我现在有一组数据，做的NK分型，下面的分析不知道对不对。因为实验不是我做的，是一个师弟做的，老师让我来分析。师弟用的分型是这样的
抗体CD3、CD56、CD16、NKB1、CD94、CD57；
NKB1+、CD94-为matureNK
NKB1+、CD94+为intermediate matureNK
NKB1-、CD94+为maturingNK
CD57+为terminally differeantiated NK

laogong

这个是流式图

niwanmao

laogong 发表于 2020-4-11 00:15
这个是流式图

NKB1=CD158e1，这个应该跟成熟无关吧？不知道你参考的是哪篇文献的依据呢？

laogong

niwanmao 发表于 2020-4-11 15:00
NKB1=CD158e1，这个应该跟成熟无关吧？不知道你参考的是哪篇文献的依据呢？ ...

这个分型是BD公司的一个人设计的。参考文献不太清楚。
如果NKB1不能用来分型，那我是否可以这样进行分型
CD3-CD56^bright/+CD16- CD94+   immature
CD3-CD56^bright/+CD16+CD94+  intermediate mature（maturing）
CD3-CD56^dim/- CD16+CD94-   mature
CD3-CD56^dim/- CD16+CD94-CD57+ terminally differeantiated

niwanmao

laogong 发表于 2020-4-11 19:42
这个分型是BD公司的一个人设计的。参考文献不太清楚。
如果NKB1不能用来分型，那我是否可以这样进行分型
...

可以的   d=====(￣▽￣*)b

laogong

niwanmao 发表于 2020-4-14 15:20
可以的   d=====(￣▽￣*)b

谢谢倪老师！

yiyishilihui

倪老师，请教一下做NK cell功能, 看文献发现大多检测细胞因子分泌，为什么有的使用K562这个细胞系，有的没用？检测NK细胞细胞因子分泌需要用到这个细胞系吗？NK细胞杀伤功能不用这个细胞系直接PMA+ION刺激可以检测细胞因子+CD107a吗？

niwanmao

yiyishilihui 发表于 2020-12-23 20:10
倪老师，请教一下做NK cell功能, 看文献发现大多检测细胞因子分泌，为什么有的使用K562这个细胞系，有的没 ...

细胞因子还是用PMA刺激最理想