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[标本处理] 做TIL时,到底选不选用梯度密度离心法?

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发表于 2020-3-26 19:12:10 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
本帖最后由 immunology 于 2020-3-26 19:13 编辑

很多文献不建议在做肿瘤浸润的免疫细胞,如TIL,甚至做PBMC流式的时候用ficoll或者percoll等密度分层液,说这样会丢失很多免疫细胞亚群,甚至对趋化因子受体等marker的表达水平都有影响(1)。但是在做肿瘤浸润淋巴细胞的时候,如果不把肿瘤细胞通过密度梯度离心离掉,那么大部分流式收的events都应该是肿瘤细胞吧,是否会导致收的有用的数据量太小?
有什么比较好的方法可以解决这一问题?是否建议做TIL或者肿瘤浸润的其他免疫细胞实验时用梯度密度离心法?




参考文献:[1] Maecker H.T., McCoy J.P., Nussenblatt R. Standardizingimmunophenotyping for the Human Immunology Project. Nat Rev Immunol. 2012,12(3): 191-200


发表于 2020-3-26 19:56:34 | 显示全部楼层
检测?
如果检测的话,为什么消化成单细胞之后,不直接标记和获取呢?
发表于 2020-3-27 08:56:06 | 显示全部楼层
不建议用分离的方法,制成单细胞悬液后用CD45设门分析,既简单,又不丢细胞成份。
 楼主| 发表于 2020-3-27 10:52:47 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-3-26 19:56
检测?
如果检测的话,为什么消化成单细胞之后,不直接标记和获取呢?

老师的意思是,如果分选培养的话,可以考虑梯度密度离心?
 楼主| 发表于 2020-3-27 11:00:32 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-3-27 08:56
不建议用分离的方法,制成单细胞悬液后用CD45设门分析,既简单,又不丢细胞成份。 ...

谢谢老师回复,那您觉得如果做PBMC的话,裂完红直接检测好呢,还是不裂红直接用密度分层液分层后再检测好?
发表于 2020-3-27 17:08:56 | 显示全部楼层
immunology 发表于 2020-3-27 11:00
谢谢老师回复,那您觉得如果做PBMC的话,裂完红直接检测好呢,还是不裂红直接用密度分层液分层后再检测好 ...

裂红效果好。
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