细胞周期图解析

surprise0712 · 发表于 2011-3-22 15:40:25

我最近做了几次细胞周期（肿瘤细胞株），图如下，怎么看这些图能不能用是否可信呢？很奇怪有几次测得G2期为0，想问问各位高手这是什么原因。我是先用70%酒精固定再用PI染色的，染色前我在显微镜下看了细胞的形态，也大多都是单个细胞，没有聚集。实验下一步该如何改进，敬请赐教万分感谢。

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stef1981 · 发表于 2011-3-22 16:05:41

这个值不可信，误差太大，可能是染色不够充分，或者没有去处RNA的干扰，或者细胞碎片太多。注意染色步骤是否正确

surprise0712 · 发表于 2011-3-22 16:30:28

我染色步骤如下
1 收集细胞，离心去上清，1000rpm
2 PBS洗两遍，弃上清，1800rpm
3 适量PBS把细胞吹匀，成单细胞悬液，再加入冰冷的70%乙醇4度固定过夜
4 离心去固定液，1000rpm，PBS洗一遍，1000rpm，弃上清
5 PI染液（含RNA酶）常温避光染色30min

niwanmao · 发表于 2011-3-22 17:06:09

我最近做了几次细胞周期（肿瘤细胞株），图如下，怎么看这些图能不能用是否可信呢？很奇怪有几次测得G2期为 ...
surprise0712 发表于 2011-3-22 15:40

登录/注册后可看大图

需要看一下FL2-A/FL2-W的点图。拟合的话应该还可以。
另外，如果要上传图片，建议把图片格式存为JPG或PNG格式，可以让文件小很多。

niwanmao · 发表于 2011-3-22 17:07:29

我染色步骤如下
1 收集细胞，离心去上清，1000rpm
2 PBS洗两遍，弃上清，1800rpm
3 适量PBS把细胞吹匀，成 ...
surprise0712 发表于 2011-3-22 16:30

登录/注册后可看大图

一般如果按照protocol来的话，步骤不大会有问题。

stef1981 · 发表于 2011-3-23 08:31:25

PI染液和RNA酶的浓度是否有问题？

兔子赵 · 发表于 2011-3-23 16:29:29

FL2-A/FL2-W的点图呢？有的细胞需要把电压调到很到才可以
如果电压足够大那么就是染色有问题

“3 适量PBS把细胞吹匀，成单细胞悬液，再加入冰冷的70%乙醇4度固定过夜”一般反过来加，就是向冰乙醇中加样品，效果会好一些

初学者 · 发表于 2011-9-6 11:20:33

之前我PI单染检测凋亡的时候，也把细胞周期的数值记录了一下，也是G2为0，但是后来又进行了几次试验，并且改变了电压大小，结果就理想了很多，不知道楼主最近是否还在进行试验，结果是不是已经改善了！

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