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做磷酸化蛋白流式,其实很容易,但需注意条件探索

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发表于 2020-4-7 16:53:43 | 显示全部楼层 |阅读模式

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多聚甲醛固定后,分别以50%甲醇或80%甲醇冰上孵育10分钟破膜,即可检测到磷酸化蛋白,但是两种浓度各有优缺点,50%的甲醇适合p-ERK和p-S6,而80%甲醇适合p-STAT5检测。
20200407_164948.jpg


由于有时候我们还需要表面标记来区分不同的细胞亚群,所以就需要考虑到对表面抗原的影响,那么50%和80%的甲醇哪种更好呢?看下图,很明显,50%甲醇对CD14的荧光强度影响最小(上行是50%甲醇,下行是80%甲醇,左侧均为不加甲醇的对照)
20200407_165002.jpg


综上所述,多聚甲醛搭配甲醇,就能够帮助我们方便地检测磷酸化蛋白,但是对于不同的靶标,我们还是需要做好不同浓度的探索,找出对结果影响最小的浓度。

图片来源:Cossarizza A, Chang HD, Radbruch A, et al. Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies (second edition). Eur J Immunol. 2019;49(10):1457–1973. doi:10.1002/eji.201970107
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发表于 2020-4-15 21:41:40 | 显示全部楼层
so useful, so appreciated for learning phosphorylation detection by FACS.
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