嵌合T细胞表面的弱作用力scFV检测

风之灵

目前制备了一个针对CD30的CAR-T产品，及在T细胞表面嵌合了一个特异性识别CD30分子的scFV抗体。但一方面T细胞表面表达的scFV较少，另一方面scFV对CD30识别相对较弱。
1、现在流式检测手段是以Protein L识别scFV的kappa轻链，然后再以荧光标记抗体识别Protein L，但感觉T细胞阳性率偏低。猜测可能是Protein L与kappa轻链作用较弱造成（scFV中kappa轻链只含有部分，并非完整），有什么方法增强流式检测中分子相互作用力。
2、另一方面计划以CD30-Fc嵌合蛋白为中介分子进行检测，有什么值得注意的吗？

niwanmao

风之灵 发表于 2020-4-8 21:07
感谢回答，您提到的这个即为上文提到的以CD30-Fc蛋白或CD30-FITC直接与scFV相互作用。如果scFv和CD30见的 ...

用CD30抗原本身检测，不可能弱。
因为你本身就是要去结合靶细胞上的CD30抗原，如果还是弱，只能说明scFv的结合力差，说明原先的设计上面有问题，治疗效果也不会好。

niwanmao

用商品化的抗原检测也可以啊，效果应该比Protein L要好：https://www.acrobiosystems.com/A ... CAR-Expression.html

风之灵

niwanmao 发表于 2020-4-8 15:01
用商品化的抗原检测也可以啊，效果应该比Protein L要好：https://www.acrobiosystems.com/A1041-Solutions- ...

感谢回答，您提到的这个即为上文提到的以CD30-Fc蛋白或CD30-FITC直接与scFV相互作用。如果scFv和CD30见的作用力还是较弱的话，您有什么好的建议吗？