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关于是不是要用同型对照，几十年下来，争议不断，这不，1999年这篇文章，还是值得我们再回头看看的。任何优点和缺点，都是在特定情况下的。
Keeney等人在《Isotype controls in the analysis of lymphocytes and CD34+ stem and progenitor cells by flow cytometry--time to let go!》中认为在计数CD34阳性干细胞，同种型对照没什么用处，实际上，在其它稀有事件分析的例子中，同种型对照确实用处也不大。同种型对照具有局限性，在Keeney的观点中得到了扩展，因为同型对照的作用，都可通过一些其他试剂、工具或先进的设门策略替代。 但是，O'Gorman在1999年写了篇Comment，提供了一些示例，认为有某些情况下，同型对照有用且确实值得推荐。
同型对照的缺陷
理论上，同型对照是作为“阴性对照”，即衡量的是抗体染色时的背景荧光或非特异性荧光。在理想情况下，根据同型对照设门，可以将同型对照以外的信号确定为目标抗体的特异性染色。不幸的是，同型对照并不是完美的阴性对照。原因如下：
（1）单克隆抗体是转化的杂交瘤细胞分泌的蛋白，因此尽管同型对照和目标抗体的免疫球蛋白的亚类可以匹配，但仍会存在细微的差异，因为这些杂交瘤不是正常细胞。
（2）尽管纯化、结合和再纯化单克隆抗体的程序已得到显著改善，但各批次之间或各公司之间的程序并不完全一致。
（3）即使免疫球蛋白亚类匹配、F/P比和浓度均一致，同型对照的背景结合能力可能仍然存在差异。
但是，O'Gorman认为，如果在了解了这些限制的情况下使用它们，那么它们可能会特别有用，并且对同型对照可以提供的信息不会有不切实际的期望。
同型对照值得应用的场景
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发表于 2020-4-14 14:48:24
发表于 2020-4-15 21:24:41