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[淋巴细胞亚群] C57小鼠组织检测Th17/Treg

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发表于 2020-4-24 14:47:43 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星已解决
本帖最后由 杨山南 于 2020-4-24 14:47 编辑

流式初学者分选C57小鼠组织中的Th17/Treg,目的是看组织中最原始的Th17/Treg分布情况
Treg 的选的maker是CD4+CD25+Foxp3+ ;Th17的maker是:CD4+RORgt+IL-17
实验过程是制成单细胞悬液后用invitrogen的刺激试剂(eBioscience™ Cell Stimulation Cocktail plus protein transport inhibitors) 37度刺激5小时,然后染表染maker:CD45,CD3, CD8, CD25,  然后破核染foxp3, RoRgdt和IL—17。
问题是:刺激之后T细胞会有增殖和分化,各表型的T细胞占比肯定会有变化,这样染出的treg和Th17的占比情况还能代表原来的组织中它们情况吗?可是不刺激怎么染IL—17呢鉴定Th17呢
求指点

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只要CD4能分群,比例就是准确的。
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发表于 2020-4-24 14:47:44 | 显示全部楼层
杨山南 发表于 2020-4-26 07:41
谢谢老师!我这两天看到有资料说在PMA的刺激下, CD4表达迅速下调, 此时采用CD4来标记Th细胞已经不能准确的 ...

只要CD4能分群,比例就是准确的。
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发表于 2020-4-24 17:48:57 | 显示全部楼层
可以代表,因为刺激后能分泌IL-17的才说明这些细胞是Th17,本身就存在的。
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 楼主| 发表于 2020-4-26 07:41:39 | 显示全部楼层
谢谢老师!我这两天看到有资料说在PMA的刺激下, CD4表达迅速下调, 此时采用CD4来标记Th细胞已经不能准确的检测Th细胞,可是我刺激后检测的Th17/Treg却是从CD4门里圈出来的,CD4都改变了,不是组织最原始的情况了,后面这些还有圈门还有意义吗?
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