请教大家PE和Percp /cy5.5 调补偿的问题

succula

请教大家关于PE和Percp /cy5.5  调补偿的问题。实验设计如下，我使用的是补偿微球做单染对照，配色方案用到了Percp /cy5.5,PE, APC, APC/Cy7, BV421和FITC。 在补偿调节中无论如何调节PE电压，都会 出现强烈的PE信号，导致无法做补偿，难道PE和Percp /cy5.5  这两个染料不能一起使用吗？
此外，还有个问题就是PE和beads的流式图居然跑出了细胞的形态，很多碎片，但是其他抗体和beads结合就是正常的，请大家不吝赐教。

niwanmao

首先这个液路要先清洗一下。
其次，调节补偿，是需要做各个荧光通道两两组合的散点图，而不是用SSC

范晋波

做补偿调节前，请务必确认好两件事，电压和阈值，我看你的前侧向的图，你可能没调阈值，所以会有假阴性干扰，阈值调到FSC调到3万到4万试试看，而且你可以反向圈门看看非正常细胞群（微球群）是否和你的目的微球的前侧向位置一致。