一管经过多中心验证的6色初始/记忆T细胞方案

niwanmao

免疫监测在免疫肿瘤学领域变得越来越重要，因为它能识别潜在的预后/预测性免疫生物标记并更好地了解其潜在作用机制，从而改善个性化治疗。
流式细胞学是一种常用的解析免疫表型的强大技术，因为它具有多维、高通量的独特能力。然而，鉴于当前的免疫治疗研究中使用的多色方案的复杂性，要达成一个一致的标准化步骤、方案，是确保实验室之间数据重现性的关键，尤其是在多中心试验中。
在大多数情况下，从治疗阶段到随访期，要在延长的时间间隔内对患者的反应进行监测，在这种情况下，必须将测定的可重复性视为强制性的。在临床癌症研究中，由于与肿瘤组织相比，采用全血更具有可行性和可重复性，因此外周血白细胞亚群的免疫表型分析被认为是探索辅助治疗决策的免疫学标志物的重要方法。特别是，几篇论文报道了在不同类型的癌症（例如非小细胞肺癌（NSCLC）和黑色素瘤）中，初始/记忆性T细胞亚群对免疫疗法的反应具有预后和/或预测性。

Macchia I等人在2020年4月12日发表在J Immunol Res.的多中心研究中，介绍了一管我们平时经常用的方案：
CD4、CCR7、CD8、CD3、CD45RA
如果样本是PBMC，由于只有单个核细胞，故CD45省掉，但因冻存、复苏的缘故，不可避免发生细胞死亡，故加一个死活染料；
如果样本是全血，由于新鲜采集，则不需要考虑死活，直接加CD45区分出淋巴细胞群体。


CCR7和CD45RA散点图，可定义四个功能性T细胞亚群：初始T（N，CCR7 + CD45RA +）；中央记忆T（CM，CCR7 + CD45RA−）; 效应记忆T（EM，CCR7-CD45RA-），和终末分化效应T（TD，CCR7 - CD45RA +）：


在各自实验室分析PBMC时，每个参与者之间的一致性相当高，只有初始CD8+T和终末分化效应CD4+T相差略大，并且中心统一分析也只能降低但不会消除这种差别。 在全血（WB）中，差异的参数相对较多，这种差异最有可能由于参与实验室做WB的经验不足，对SOP的理解上，T细胞设门不够准确，通过中心统一分析可消除这种差异。


所以，这个方案和SOP，总体来说，是相当不错的。
对于其它免疫细胞的方案，其实都值得用类似的方式来找到实现一致结果的协作方法。
信源：Macchia I, La Sorsa V, Ruspantini I, et al. Multicentre Harmonisation of a Six-Colour Flow Cytometry Panel for Naïve/Memory T Cell Immunomonitoring. J Immunol Res. 2020;2020:1938704. Published 2020 Apr 12. doi:10.1155/2020/1938704

Veblen

这里的NIR用哪个通道呢

niwanmao

Veblen 发表于 2020-5-5 16:01
这里的NIR用哪个通道呢

发射波长730nm，可在APC-A700或Alexa Fluor 700通道检测