CFSE检测淋巴细胞增殖CD3内吞问题

南瓜妹妹

CFSE检测淋巴细胞增殖实验中，在加入CD3/CD28刺激培养三天后，孵育CD3抗体上机检测，发现CD3基本是检测不到，无法分群，是什么原因呢？是CD3内吞了吗？CD4会不会也存在内吞的现象呢？如果内吞了那么怎么标记圈出淋巴细胞分析其增殖呢？

niwanmao

CD3不会发生内吞的，只有CD4出现，这是反复证实了。
所以你得从设门上找原因，或者抗体标记上找原因。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-6 08:16
CD3不会发生内吞的，只有CD4出现，这是反复证实了。
所以你得从设门上找原因，或者抗体标记上找原因。 ...

谢谢倪老师！可能是我APC-CD3的抗体加少了，然后这个通道的电压也偏低，导致CD3分群不明显。我不知道该怎么上传图片，不然可以传上来看看。

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-5-6 09:42
谢谢倪老师！可能是我APC-CD3的抗体加少了，然后这个通道的电压也偏低，导致CD3分群不明显。我不知道该怎 ...

上传图片两个方法，一个是点顶帖的「编辑」按钮，另一个是回帖时，点击编辑器右上的「高级模式」。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-6 10:45
上传图片两个方法，一个是点顶帖的「编辑」按钮，另一个是回帖时，点击编辑器右上的「高级模式」。 ...

就是这些图，不知道上传成功没有，用的是flowjo分析的

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-6 10:45
上传图片两个方法，一个是点顶帖的「编辑」按钮，另一个是回帖时，点击编辑器右上的「高级模式」。 ...

倪老师，图传上去了，能帮忙看看吗？谢谢您！

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-5-7 13:41
倪老师，图传上去了，能帮忙看看吗？谢谢您！

从CFSE的染色看，总感觉怪怪的。培养3天的话，父代的荧光不应该这么弱吧

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-7 14:32
从CFSE的染色看，总感觉怪怪的。培养3天的话，父代的荧光不应该这么弱吧

CFSE的浓度时1uM, 培养了快四天后做的，会不会是浓度低了，我重新做了一次把浓度调到了5um

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-7 14:32
从CFSE的染色看，总感觉怪怪的。培养3天的话，父代的荧光不应该这么弱吧

会是CSFE的问题吗？

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-5-7 15:08
会是CSFE的问题吗？

细胞密度为50×10E6/ml时，可用5uM CFSE标记
而细胞密度为1×10E6/ml，需要改用1uM CFSE。