查看: 222|回复: 22
收起左侧

[细胞增殖] CFSE检测淋巴细胞增殖CD3内吞问题

[复制链接]
发表于 2020-5-5 21:48:47 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
CFSE检测淋巴细胞增殖实验中,在加入CD3/CD28刺激培养三天后,孵育CD3抗体上机检测,发现CD3基本是检测不到,无法分群,是什么原因呢?是CD3内吞了吗?CD4会不会也存在内吞的现象呢?如果内吞了那么怎么标记圈出淋巴细胞分析其增殖呢?

发表于 2020-5-6 08:16:48 | 显示全部楼层
CD3不会发生内吞的,只有CD4出现,这是反复证实了。
所以你得从设门上找原因,或者抗体标记上找原因。

评分

参与人数 1流星 +3 收起 理由
Myword + 3 赞一个!

查看全部评分

 楼主| 发表于 2020-5-6 09:42:15 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-6 08:16
CD3不会发生内吞的,只有CD4出现,这是反复证实了。
所以你得从设门上找原因,或者抗体标记上找原因。 ...

谢谢倪老师!可能是我APC-CD3的抗体加少了,然后这个通道的电压也偏低,导致CD3分群不明显。我不知道该怎么上传图片,不然可以传上来看看。
发表于 2020-5-6 10:45:51 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-5-6 09:42
谢谢倪老师!可能是我APC-CD3的抗体加少了,然后这个通道的电压也偏低,导致CD3分群不明显。我不知道该怎 ...

上传图片两个方法,一个是点顶帖的「编辑」按钮,另一个是回帖时,点击编辑器右上的「高级模式」。
 楼主| 发表于 2020-5-6 11:17:36 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-6 10:45
上传图片两个方法,一个是点顶帖的「编辑」按钮,另一个是回帖时,点击编辑器右上的「高级模式」。 ...

就是这些图,不知道上传成功没有,用的是flowjo分析的
fb1f47a7022ec7a9c347d03d217f848.png
5fce21cb0e3b577dff95d163619260d.png
a434b6e60d2401affb5447152ff62e4.png
 楼主| 发表于 2020-5-7 13:41:03 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-6 10:45
上传图片两个方法,一个是点顶帖的「编辑」按钮,另一个是回帖时,点击编辑器右上的「高级模式」。 ...

倪老师,图传上去了,能帮忙看看吗?谢谢您!
发表于 2020-5-7 14:32:13 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-5-7 13:41
倪老师,图传上去了,能帮忙看看吗?谢谢您!

从CFSE的染色看,总感觉怪怪的。培养3天的话,父代的荧光不应该这么弱吧
 楼主| 发表于 2020-5-7 14:37:59 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-7 14:32
从CFSE的染色看,总感觉怪怪的。培养3天的话,父代的荧光不应该这么弱吧

CFSE的浓度时1uM, 培养了快四天后做的,会不会是浓度低了,我重新做了一次把浓度调到了5um
 楼主| 发表于 2020-5-7 15:08:40 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-5-7 14:32
从CFSE的染色看,总感觉怪怪的。培养3天的话,父代的荧光不应该这么弱吧

会是CSFE的问题吗?
发表于 2020-5-7 17:49:30 | 显示全部楼层
南瓜妹妹 发表于 2020-5-7 15:08
会是CSFE的问题吗?

细胞密度为50×10E6/ml时,可用5uM CFSE标记
而细胞密度为1×10E6/ml,需要改用1uM CFSE。
您需要登录后才可以回帖 登录 | 加入流式中文网

本版积分规则

手机版|流式中文网    

GMT+8, 2020-6-5 21:40

Powered by Discuz! X3.4

© 2001-2013 Comsenz Inc.