为什么我单染Brdu没有细胞分群，而只有一个细胞团块？

qyj2017

很奇怪，我染了好几次，几次都没有明显细胞分群，只有一两次有，单染Brdu,收细胞前加进去（30 μM）作用40min，2%多聚甲醛固定过夜.用的是凯基的试剂盒，按照它说明书步骤来的。

倪老师求解啊，我做了好几次了。。。。下两张图横坐标FITC,纵坐标SSC--H 。我做了好几次都是第一张图这种，没有明显分群，很奇怪。

这是没有分群的 横坐标FITC 纵坐标SSC-H

这是我做出来的有分群的

qyj2017

@niwanmao 倪老师，求解啊，哭

qyj2017

顶 好心人有吗

tiger

qyj2017 发表于 2020-5-7 16:45
顶 好心人有吗

图上看不到坐标

范晋波

固定之后还有破膜，DNA变性的步骤，变形后还需要加 Brdu 进行染色吧，如果方便的话你可以把货号或者说明书发出来让大家帮你分析一下

范晋波

还有他的试剂盒成分中变性剂是需要-20 下保存的，不知道你是否按照这个做的

qyj2017

tiger 发表于 2020-5-7 17:07
图上看不到坐标

已上传带坐标原图

qyj2017

范晋波 发表于 2020-5-7 17:20
还有他的试剂盒成分中变性剂是需要-20 下保存的，不知道你是否按照这个做的 ...

步骤如图所示，我的变性剂没有放在-20保存，会不会是变性剂失效了呢？但是我之前也做出来过分群的效果，不知道哪里重点问题出错了

qyj2017

tiger 发表于 2020-5-7 17:07
图上看不到坐标

第一张图用的是APC通道的Brdu试剂盒，第二张图是FITC通道的，试剂盒都是同一家公司的产品，除了抗体不同其他都一模一样

qyj2017

感觉这个分的也不是很开。。