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[细胞增殖] 为什么我单染Brdu没有细胞分群,而只有一个细胞团块?

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发表于 2020-5-7 14:40:11 | 显示全部楼层 |阅读模式
5流星
很奇怪,我染了好几次,几次都没有明显细胞分群,只有一两次有,单染Brdu,收细胞前加进去(30 μM)作用40min,2%多聚甲醛固定过夜.用的是凯基的试剂盒,按照它说明书步骤来的。

倪老师求解啊,我做了好几次了。。。。下两张图横坐标FITC,纵坐标SSC--H 。我做了好几次都是第一张图这种,没有明显分群,很奇怪。

这是没有分群的 横坐标FITC 纵坐标SSC-H

这是没有分群的 横坐标FITC 纵坐标SSC-H

这是我做出来的有分群的

这是我做出来的有分群的

 楼主| 发表于 2020-5-7 14:42:49 | 显示全部楼层
@niwanmao 倪老师,求解啊,哭
 楼主| 发表于 2020-5-7 16:45:05 | 显示全部楼层
顶 好心人有吗
发表于 2020-5-7 17:07:28 | 显示全部楼层

图上看不到坐标
发表于 2020-5-7 17:16:29 | 显示全部楼层
固定之后还有破膜,DNA变性的步骤,变形后还需要加 Brdu 进行染色吧,如果方便的话你可以把货号或者说明书发出来让大家帮你分析一下
发表于 2020-5-7 17:20:02 | 显示全部楼层
还有他的试剂盒成分中变性剂是需要-20 下保存的,不知道你是否按照这个做的
 楼主| 发表于 2020-5-7 17:22:20 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-5-7 17:07
图上看不到坐标

已上传带坐标原图

有分群

有分群

无分群

无分群
 楼主| 发表于 2020-5-7 17:28:13 | 显示全部楼层
范晋波 发表于 2020-5-7 17:20
还有他的试剂盒成分中变性剂是需要-20 下保存的,不知道你是否按照这个做的 ...

步骤如图所示,我的变性剂没有放在-20保存,会不会是变性剂失效了呢?但是我之前也做出来过分群的效果,不知道哪里重点问题出错了
微信图片_20200507172218.jpg
微信图片_20200507172227.jpg
 楼主| 发表于 2020-5-7 17:29:33 | 显示全部楼层
tiger 发表于 2020-5-7 17:07
图上看不到坐标

第一张图用的是APC通道的Brdu试剂盒,第二张图是FITC通道的,试剂盒都是同一家公司的产品,除了抗体不同其他都一模一样
 楼主| 发表于 2020-5-7 17:32:43 | 显示全部楼层
感觉这个分的也不是很开。。

这是我前几天用新买的FITC试剂盒做的

这是我前几天用新买的FITC试剂盒做的
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